NYT 1582-2007油菜籽中硫代葡萄糖苷的测定 高效液相色谱法.pdf

ICS 65.020B 04NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 1582—2007油菜籽中硫代葡萄糖苷的测定高效液相色谱法Rapeseed-Determination of glucosinolates content-Method using high-performance liquid chromatography(ISO 9167-1:1992(E)Part 1,IDT)2008-03-01实施2007-12-18 发布中华人民共和国农业部发布 NY/T 1582—2007前言本标准等同采用ISO 9167-1:1992(E)-一Part 1:油菜籽中硫武含量测定高效液相色谱法。为便于使用,本标准作了下列编辑性修改：a）“本国际标准”一词改为“本标准”；b）用小数点“”代替作为小数点的逗号“，”；c）删除国际标准的前言。本标准的附录 C为规范性附录,附录 A 和附录 B为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部种植业管理司提出并归口。本标准起草单位：农业部油料及制品质量监督检验测试中心。本标准主要起草人：李培武、张文、汪雪芳、丁小霞、李光明、胡乐华。 NY/T 1582—2007油菜籽中硫代葡萄糖苷的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了采用高效液相色谱法测定油菜籽中硫代葡萄糖苷含量的方法。本标准适用于油菜种子及商品菜籽中硫代葡萄糖苷含量的测定，不适用于葡萄糖分子被取代的硫代葡萄糖苷样品分析。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的必威体育精装版版本。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本适用于本标准。GB 5491粮食、油料检验　扦样、分样法GB 6682实验室用水规定(GB 6682—1992,eqv ISO 3696—1987)GB/T 14488.1油料种子含油量测定法(GB/T14488.1—1993,eqvISO659—1988)GB/T14489.1油料水分及挥发物含量测定法(GB/T14489.1—1993，eqvISO665—1977)3原理用甲醇一水溶液（70十30），提取硫代葡萄糖苷，然后在阴离子交换树脂上纯化并酶解脱去硫酸根，反相 C18柱分离,紫外检测器检测硫代葡萄糖苷。4 试剂除非另有规定，仅使用分析纯试剂。4.1水:符合GB/T 6682标准二级的规定。4.2硫酸酯酶:Helix pomatia H1 型(EC),每毫升硫酸酯酶活性单位不低于 0.5,硫酸酯酶溶液应即配即用。4.3葡聚糖凝胶悬浮液:称取 10g DEAE Sephadex A25葡聚糖凝胶,浸泡在过量的 2 mol/L醋酸溶液中，静置沉淀，再加人2mol/L醋酸溶液，直到液体体积是沉淀体积的2倍，于 4℃冰箱中存放，待用。4.4甲醇一水溶液(70+30):量取 70mL甲醇与 30mL水混合。4.50.02mol/L醋酸钠溶液：称取0.272g醋酸钠(CHCOONa·3H²O)，加人800mL水溶解，用醋酸调节溶液的pH至 4.0,加水定容至1L。4.66mol/L甲酸咪唑溶液：称取204g咪唑，溶解于113mL甲酸中，待溶液冷却后加水定容至500mL.4.7内标：用丙烯基硫代葡萄糖苷(Mr=415.49)作内标，当样品中含有丙烯基硫代葡萄糖苷时，用苯甲基硫代葡萄糖苷(Mr=447.52)作内标。当样品硫代葡萄糖苷含量低于20.0μmol/g时，可将下述4.7.1至4.7.3中的内标物质浓度降低为1mmol/L至 3mmol/ L。内标溶液在 4℃的冰箱中可存放 3周,在一18℃条件下可保存更长时间，内标溶液的纯度检定参照附录A执行。4.7.15mmol/L丙烯基硫代葡萄糖苷溶液：称取207.7mg丙烯基硫代葡萄糖苷溶解于80mL水中，1 NY/T 1582-2007加水定容至100 mL。4.7.220mmol/L丙烯基硫代葡萄糖苷溶液：称取831.0mg丙烯基硫代葡萄糖苷溶解于80mL水中，加水定容至100mL。4.7.35mmol/L苯甲基硫代葡萄糖苷溶液：准确称取223.7mg苯甲基硫代葡萄糖苷溶解于80mL水中,加水定容至 100 mL。4.7.420 mmol/L苯甲基硫代葡萄糖苷溶液：准确称取 895.0 mg 苯甲基硫代葡萄糖苷溶解于 80 mL水中,加水定容至 100 mL。4.8流动相A：超声波脱气30s的水。4.9流动相B:取200mL色谱级乙腈,加人800mL水，混匀，超声波脱气30s。5仪器和设备5.1实验室常用仪器设备。5.2研钵或微型研磨机。5.3聚丙烯离子交换微柱,底部筛板为100 目。5.4离心机:带有10mL转头,并能获得 500