NY 567-2002兔出血性败血症诊断技术.pdf

ICS_11. 220B 41NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 567—2002兔出血性败血症诊断技术Diagnostic techniques for rabbit haemorrhagic septicemia2002-08~27 发布2002~12-01实施中华人民共和国农业部发布 中华人民共和国农业行业标准免出血性败血症诊断技术NY/T 567--2002中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码：100045电话：6852394668517548中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷新华书店北京发行所发行各地新华书店经售*开本880×12301/16　印张1/2字数10千字2002年12月第一版2002年12月第一次印刷印数 1-1 500* NY/T 5672002前言兔出血性败血症(rabbit haemorrhagic septicemia)又称兔多杀性巴氏杆菌病,是家兔的一种重要的呼吸道传染病。本病主要引起家兔的出血性坏死性肺炎，多呈最急性或急性病程迅速死亡,也有的表现为慢性、局部性病变，如结膜炎、鼻炎等。本病可发生于任何年龄的家兔，尤其在集约化养兔场，一旦发生会造成重大经济损失。本标准采用的技术与世界动物卫生组织[World Organization for Animal Health(英）,Office Intentional des Epizootic(法),OIE]推荐的其他动物巴氏杆菌病诊断技术基本一致,本标准是参考这些技术，根据本国的研究和诊断实践经验制定的。本标准的附录 A 为规范性附录。本标准由农业部畜牧兽医局提出。本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归口。本标准起草单位：江苏省农业科学院畜牧兽医研究所。本标准主要起草人：王启明、董亚芳。 NY/T 567—2002兔出血性败血症诊断技术1范围本标准规定了兔出血性败血症(兔巴氏杆菌病)的诊断技术。本标准适用于本病的病原学诊断和产地检疫。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的必威体育精装版版本。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本适用于本标推。GB4789.28一1994食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂GB/T14926.5-2001实验动物　多杀巴斯德杆菌检测方法NY/T 564—2002猪巴氏杆菌病诊断技术3材料和试剂3.1培养基:马丁琼脂、马丁肉汤，制备方法见附录A。3.216 g～20 g重实验动物小白鼠。4检验程序检验程序见图 1。检样 血琼脂平血36℃±1℃24 h~~48 【马丁琼脂平（分纯）360±1Ct 18 h~24 h45°折光显微镜检查涂片镜检生化试验动物试验麦康凯琼脂平血告卜1报图 1 检验程序流程图 NY/T 567--20025检验具体步骤5.1采样采取鼻咽部或气管分泌物；肺等病灶或心血。5.2分离培养将样品划线接种于血琼脂（见GB4789.28一1994中4.6)平血，并置其于36℃士1℃温箱培养24h～48h,挑选灰白色、不溶血、光滑露滴样菌落转种于马丁琼脂（见第A.1章)平皿，置36℃士1℃温箱培养 18 h～24 h，挑选半透明圆润露珠状,直径 1mm～2mm左右的菌落，在 45°折光显微镜下观察，可见周边带绿色荧光的黄红色Fo型菌落，可用于生化鉴定。多杀性巴氏杆菌在麦康凯琼脂（见GB 4789.28—1994中4.24)平血上不生长。5.3形态与染色按GB/T14926.5-2001中5.3规定进行。5.4接种高层三糖铁琼脂斜面按GB/T14926.5—2001中5.4规定进行。5.5生化试验按GB/T14926.5-2001中5.5规定进行。6 动物试验6.1自 5.2马丁琼脂平Ⅲ上挑取分离纯粹的多杀性巴氏杆菌标准单个菌落 4～5个，接种于马丁肉汤（见第A.2章）中试管内，置36℃±1℃温箱内培养18h～24h，菌液含活菌数约在8千万/mL～1.2亿个/mL。6.2将上述菌液经稀释后腹腔注射小白鼠3只,每只约为1000个菌体,小白鼠应于 7日内死亡,并自心血中分离出原接种菌，以证实分离菌有致病力。7 结果判定根据以上生物特性、生化试验和动物试验的结果进行判定,结果与 5.2～5.5及第 6章规定的情况相符时作出阳性报告，不符合者作出阴性报告。8 血清群和血清型鉴定有两种血清学试验，作为有条件实验室选做项目，以进行更精确的细菌学鉴定。试验程序见NY/T564—2002中第4章。2 NY/T 567—2002附录A(规范性附录)培养基的配制A.1马丁琼脂制备方法牛肉汤500 mL猪胃消化液500 mL琼脂20 g~25 gA.1