NY_T 2060.4-2011辣椒抗病性鉴定技术规程 第4部分：辣椒抗黄瓜花叶病毒病鉴定技术规程.pdf

ICS 65.020B 15NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 2060.4—2011辣椒抗病性鉴定技术规程第4部分：辣椒抗黄瓜花叶病毒病鉴定技术规程Rules for evaluation of pepper for resistance to diseases-Part 4: Rule for evaluation of pepper for resistance tocucumber mosaic virus2011-09-01发布2011-12-01实施中华人民共和国农业部发布 NY/T 2060. 4—2011前言NY/T2060《辣椒抗病性鉴定技术规程》分为5个部分：第1部分：辣椒抗疫病鉴定技术规程；一第2部分：辣椒抗青枯病鉴定技术规程；第3部分：辣椒抗烟草花叶病毒病鉴定技术规程；一第4部分：辣椒抗黄瓜花叶病毒病鉴定技术规程；-第5部分：辣椒抗南方根结线虫病鉴定技术规程。本部分为NY/T2060的第4部分。本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本部分由中华人民共和国农业部种植业管理司提出。本部分由全国蔬菜标准化技术委员会（SAC/TC467)归口。本部分起草单位：中国农业科学院蔬菜花卉研究所。本部分主要起草人：杨宇红、谢丙炎、冯兰香、杨翠荣、龚慧芝、苑振川、陈国华。- NY/T2060.4—2011辣椒抗病性鉴定技术规程第4部分：辣椒抗黄瓜花叶病毒病鉴定技术规程1范围本部分规定了辣椒抗黄瓜花叶病毒病鉴定的术语和定义、接种体制备、室内抗性鉴定、病情调查、抗病性评价以及鉴定记载表格。本部分适用于各种辣椒（CapsicumannuumL.）资源对疫病抗性的室内鉴定及评价。2术语和定义NY/T1857.7一2010界定的以及下列术语和定义适用于本文件。2. 1辣椒 CMV 病毒病cucumber mosaic virus on peppers由黄瓜花叶病毒（CucumbermosaicCucumovirus，CMV)引起的病株呈现系统花叶，病叶窄小、增厚、卷曲、畸形、易脱落；有些品种叶片有大型黄绿色环斑或橡叶症状。病果有浅黄色至黄褐色环纹斑块、果少且小、畸形。重病株黄绿色、节间缩短、枝条丛生、严重时矮化呈丛簇状等症状的辣椒病毒病。3黄瓜花叶病毒接种体制备3.1病原物分离从发病植株的典型病叶上以常规汁液摩擦法分离黄瓜花叶病毒病病原物。分离物经血清学、寄主范围、枯斑寄主、理化性状及传播方式测定，电子显微镜观察病毒粒子形态等方法鉴定，确认为黄瓜花叶病毒（Cucumbermosaicvirus）后，再进行分离物纯化和致病性测定，保存备用。3.2株系鉴定对用于抗病性鉴定接种的病毒分离物首先进行株系鉴定。鉴定方法参照A.2。3.3接种体繁殖和保存3.3.1接种体繁殖取少量黄瓜花叶病毒供试株系的鲜病叶摩擦接种在枯斑三生烟（Nicotianatabacumcvs.SamsunNN)或珊西NC烟（N.t.cvs.XanthiNC)上，置防虫温室内，在26℃～28℃条件下培育7d～10d后采收病叶。3.3.2接种体保存接种体可常年保存在防虫温室内的枯斑三生烟或珊西NC烟上，或将鲜病叶制作成冻干叶保存在一20℃以下的冰箱内。冻干叶的简易制作法：将鲜病叶剪成小块，在吸水纸上均匀地铺放一层，可照此连续铺放数层，但各层吸水纸之间必须用硅胶或氯化钙隔开，然后置于密封的容器里，再将容器置于4℃冰箱。头两天每天更换一次干燥剂，以后每两天更换一次，直到碎病叶彻底干燥，整个制作过程应防止其他病毒的污染。4室内抗性鉴定4.1鉴定室苗期人工接种鉴定室通常是可调节温度和光照的防虫日光温室，使之具备良好的发病环境。1 NY/T 2060.4—20114.2鉴定设计鉴定材料随机排列或顺序排列，每份鉴定材料重复3次，每一重复10株苗。4.3鉴定对照材料设茄门甜椒为感病对照；目前尚未发现理想的抗病对照辣椒，中椒6号辣椒品种比较耐病，可试用。4.4鉴定材料育苗鉴定种子在10%磷酸三钠溶液中浸泡15min，清水冲洗后置于恒温培养箱中28℃催芽，播种于育苗钵内。育苗基质为草炭、蛭石和菜田土（2：1：1），基质经高温蒸汽灭菌（134℃，30min），在日光温室里育苗。室内温度18℃～25℃，幼苗应生长健壮、一致。4.5接种4.5.1接种时期幼苗在1片～2片真叶期进行接种。4.5.2接种浓度1g鲜病叶加30mL的0.03mol/L磷酸盐缓冲液（pH8.0）匀浆，纱布过滤或3000r/min离心15min，其滤液或上清液为接种悬浮液。4.5.3接种方法接种前将番茄幼苗黑暗处理一昼夜，再在叶面上撒适量600目金刚砂。少量鉴定可采用摩擦接种法，即充分洗净的手指蘸取接种悬浮液，在叶面轻度摩擦造成微伤，每株接种第1片～第2片真叶；大量鉴定采用喷枪接种法，即喷枪的杯内盛接种悬浮液