SN 1505-2005穿孔属线虫检疫鉴定方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1505—2005穿孔属线虫检疫鉴定方法Inspection and identification of Radopholus (Cobb) Thorne2005-02-17发布2005-07-01实施中华人民共和国发布数码防伪国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1505—2005目次前言1范围2原理c仪器、用具及药品，4现场检疫与实验室线虫分离、鉴定5形态鉴定特征描述.....6结果判定电业7标本及样品的保存附录A(规范性附录）穿孔属线虫玻片标本制作方法附录 B(资料性附录)穿孔属线虫（Radopholus spp.）检索表附录 C(资料性附录)穿孔属线虫种的形态特征图.·附录 D(资料性附录)香蕉穿孔线虫主要寄主及地理分布M SN/T言本标准的附录 A为规范性附录,附录 B、附录 C、附录 D为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国厦门出人境检验检疫局。本标准主要起草人：林奇力、陈勇、林石明、王宏毅、张汀洲。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T 1505—2005穿孔属线虫检疫鉴定方法1 范围本标准规定了穿孔属线虫（RadopholusThorne，1949），包括以前的拟穿孔属线虫（Radopholoidesde Guiran，1967)的检疫鉴定方法。本标准适用于植物繁殖材料和土壤及栽培介质中的穿孔属线虫的检疫鉴定。2原理穿孔属线虫（RadopholusThorne，1949）属线虫门（Nematoda）、侧尾腺纲（Secernentea）、垫刃目（Tylenchida）、垫刃亚目（Tylenchina）、垫刃总科（Tylenchoidea）、短体科（Pratylenchidae）。该属线虫主要为植物根系的迁移性内寄生线虫，其传播途径是植物繁殖材料和土壤及栽培介质。根据成熟的雌雄虫的形态特征进行该属线虫检疫鉴定。3仪器、用具及药品3.1仪器及用具生物显微镜、解剖镜、大管离心机、恒温箱、研钵、离心管、漏斗、漏斗架、橡皮管、止水夹、分离浅盘、线虫滤纸，网筛（60目、400目、500目）、培养皿、剪刀、刀片、天平、吸管、烧杯、载玻片、盖玻片、酒精灯、挑针等。3.2药品酒精、福尔马林、冰醋酸、甘油、三乙醇胺、聚乙烯醇、苯酚、乳酸、蒸馏水、中性树胶等。4现场检疫与实验室线虫分离、监定4.1现场检疫4.1.1检查核查单证(核对品名、数量、唛头，产地以及必需的检疫单证等)与货物是否相符。检查植物体的生长情况（长势），注意是否有矮化、黄化枯萎等症状；重点检查植物体根部（根系、须根、根眼处)和叶柄处，观察是否有变红或变黑、爆裂腐烂等症状;剖开有可疑症状根部组织，检查是否有变色、空腔、隧道等典型症状。收集上述可疑的植物材料及夹带的土壤，送实验室作线虫分离检验。4.1.2抽样除抽取一般样品外，应有针对性地重点抽取具有可疑症状的样品。将样品连同现场检查所发现的可疑症状的样品，分别用塑料袋装好，加贴标识；带回实验室后，打开袋口透气，适当保湿，放在20℃～25℃室内待检。4.2实验室线虫分离检验4.2.1直接检查解剖检查清除材料表面的土壤，放在装有适量水的培养皿或表面血中，在解剖镜下用解剖针撕开可疑的植物组织；挑取所发现的线虫，制成临时玻片（见附录A），进行检查鉴定。切片检查对草本、多汁多肉植物根系，可采用此方法。 SN/T 1505--2005清除材料表面的土壤，用刀片将切成约0.5mm厚的薄片，放在装有适量水的培养皿或表面皿中，在30℃～35℃温度下，静置 30min左右；挑取所发现的线虫，制成临时玻片，进行检查鉴定。4.2.2贝曼漏斗法分离用1层～2层纱布将已剪成0.5cm大小的植物根组织或栽培介质包好，浸没于盛水的漏斗中。经24 h后，收集漏斗底部的水样，在解剖镜下检查。挑取线虫，制成临时玻片，进行检查鉴定。4.2.3浅盘法分离分别将已剪成0.5cm大小的植物根组织或栽培介质和土壤样品放进垫有纱布或线虫分离纸（面巾纸也可替代)的浅盘中，缓慢加水淹没样品。24h后用60目和400目（或500目）的套筛过滤线虫分离液，收集400目（或500目）筛上线虫，在解剖镜下检查。挑取线虫，制成临时玻片，进行检查鉴定。4.2.4蔗糖离心分离法在隔离场圃和进行检疫调查时，可采用此方法。去除土壤样品中的植物残余组织和石块后，均匀混合该样品，放人离心管中，加人2倍土壤样品体积的水，充分搅拌均勾，以1500r/min转速离心3min～5min。停置5min,弃上层悬浮液。加人与水等体积的[密度为1.18（484g蔗糖加水至1000mL)的蔗糖溶液，搅拌均匀，以相同的转速和时间再次离心。用60目和400目（或500目)套筛过滤上清