SN_T 4419.19-2016出口食品常见过敏原LAMP系列检测方法 第19部分:胡萝卜.pdf

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中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4419.19—2016出口食品常见过敏原LAMP系列检测方法第19部分:胡萝←Food allergen detection with LAMP methods for export-Part 19 :Carrot2016-03-09 发布2016-10-01 实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局Soois全 SN/T 4419.19—2016前言SN/T4419《出口食品常见过敏原LAMP系列检测方法》由下列部分组成:第1部分:开心果;第2部分:腰果;第3部分:胡桃;第4部分:榛果;第5部分:杏仁;第6部分:扁桃仁;第7部分:巴西坚果;第8部分:澳洲坚果;第9部分:栗子;第10部分:大豆;第11部分:羽扇豆;第12部分:花生;第13部分:葵花籽;第14部分:芝麻;一第15部分:大麦;第16部分:小麦;第17部分:荞麦;第18部分:芥末;-第19部分胡萝卜;第20部分:芹菜;-第21部分:牛奶;第22部分:虾。本部分为SN/T4419的第19部分。本部分按照GB/T 1.1一-2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位:中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国山东出人境检验检疫局入本部分主要起草人:孙敏、高宏伟、刘彩霞、张舒亚、黄文胜、陈颖、韩建勋、邓婷婷、吴亚君。1 SN/T 4419.19—2016出口食品常见过敏原LAMP系列检测方法第19部分:胡萝卜1 范围SN/T 4419的本部分规定了出口食品中过敏原胡萝卜成分的环介导等温扩增(LAMP)检测方法。本部分适用于食品及其原料中过敏原胡萝卜成分的定性检测。本部分所规定方法的最低检测限(LOD)为0.1%(质量分数)。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T27403—2008实验室质量控制规范食品分子生物学检测SN/T1961.7—2013出口食品过敏原成分检测第7部分:实时荧光PCR方法检测胡萝卜成分3术语、定义和缩略语3.1术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1.1过敏原allergen又称致敏原或变应原,是指能够引起变态反应的抗原。3.1.2胡萝卜carrot别名:胡芦,红萝卜,又称甘荀,,属伞形科(Apiaceae)胡萝卜属(Daucus L.)。3.2缩略语下列缩略语适用于本文件。dNTP:脱氧核糖核苷三磷酸(deoxyribonucleoside triphosphate)LAMP:环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification)Triton X-100:聚乙二醇辛基苯基醚4防污染措施环介导等温扩增检测过程的防污染措施应符合GB/T27403一2008中附录D的规定。5 方法提要样品经研磨后,提取 DNA,以DNA 为模板,采用胡萝卜 ITS1-5.8SRNA-ITS2基因特异性检测引 SN/T 4419.19—2016物进行LAMP扩增,通过颜色变化观察判定是否存在过敏原胡萝卜成分。6LAMP检测方法6.1原理根据胡萝卜 ITS1-5.8SRNA-ITS2基因序列设计特异性内引物、外引物和环引物各一对,特异性识别靶序列上的8个独立区域。在链置换型 DNA聚合酶的作用下,内引物与模板 DNA退火、延伸,并利用外引物与模板DNA的退火延伸置换出内引物合成链。由于内引物与相邻区域存在互补区,游离的内引物合成链折叠成茎-环结构,以自身为模板,启动链置换扩增循环,合成长度不一的大量茎-环结构DNA。加人显色液,即可通过反应液的颜色变化观察判定结果。DNA聚合反应析出的焦磷酸根离子与溶液中的 Mg²+结合,形成焦磷酸镁乳白色沉淀,故也可通过反应液的浊度变化观察判定结果。显色液显色原理:SYBR Green I是一种结合于所有dsDNA双螺旋小沟区域的具有绿色荧光的染料。在游离状态下,SYBR Green I发出微弱的荧光,但一且与 dsDNA结合后,荧光大大增强。因此,SYBR Green I荧光的强度与 dsDNA 的量正相关,可以根据 LAMP反应液的荧光强度测定反应体系中的dsDNA的量。6.2仪器和设备6.2.1水浴锅或加热模板:65℃±1℃和80℃±1℃。6.2.2离心管:0.1 mL、1.5 mL。6.2.3计时器。6.2.4 移液枪:量程 0.5μL~10 μL、量程 10 μL~100 μL、量程 100 μL~1 000 μL。6.3试剂和材

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