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SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4849.3—2017出口食品及饮料中常见小浆果成分的检测方法实时荧光 PCR法第3部分：黑加仑Identification of the ingredients of common small berryfruits in food and juice for export Real-timePCR method--Part 3 : Blackcurrant2017-07-21 发布2018-03-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局星香舞刮涂 SN/T 4849.3—2017前言实时荧光PCR法》系列标准共分为SN/T4849《出口食品及饮料中常见小浆果成分的检测方法6个部分：第1部分：蓝莓；第 2 部分：树莓；第3部分：黑加仑；第4部分：桑葚；第5部分：蔓越莓和蓝莓；第6部分：猕猴桃。本部分为SN/T4849的第3部分。本部分按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由中华人民共和国国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国伊犁出人境检验检疫局。本部分主要起草人：陈颖、黄文胜、邓婷婷、吴亚君、杨艳歌、乾义柯、韩建勋、张九凯、刘鸣畅。 SN/T 4849.32017出口食品及饮料中常见小浆果成分的检测方法实时荧光PCR法第3部分：黑加仑1范围SN/T4849的本部分规定了出口食品及饮料中黑加仑成分的检测方法实时荧光PCR法。本部分适用于鲜果、冷冻果、蜜饯、鲜榨果汁、果肉型果汁、果干、果酱等以黑加仑为原辅料的初加工食品及饮料中黑加仑成分的定性检测（清汁及果酒除外）。本部分所规定方法的最低检出限（LOD)为1%（体积比）。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T27403—2008实验室质量控制规范志食品分子生物学检测3术语、定义和缩略语3.1术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1.1小浆果 small berry fruits.浆果是指由一一个子房或联合其他花器发育成的柔软多汁的肉质单果，由一个或几个心皮形成。小浆果则泛指果实较小、多汁的一类浆果。3.1.2黑加仑blackcurrant虎耳草目醋栗科醋栗属植物黑色果实，小浆果，果实近圆形，熟时黑色。拉丁文名：Ribesnigrum L..3.2缩略语下列缩略语适用于本文件。DNA：脱氧核糖核酸（deoxyribonuleic acid）。PCR:聚合酶链式反应（polymerase chain reaction）。Ct值：每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数。dNTP:脱氧核苷酸三磷酸（deoxyribonuleoside triphosphate）。dATP:脱氧腺苷三磷酸（deoxyadenosine triphosphate）。dCTP:脱氧胞苷三磷酸(deoxycytidine triphosphate)。 SN/T 4849.3—2017dGTP:脱氧鸟苷三磷酸（deoxyguanosine triphosphate）。dTTP:脱氧胸苷三磷酸(deoxythymidine triphosphate）。UNG:尿嘧啶 N-糖基化酶（uracil N-glycosylase）。CTAB：十六烷基三甲基溴化铵（cetyltrithylammonium bromide）。Tris:三羟甲基氨基甲烷［Tris(Hydroxymethyl)aminomethane]。EDTA:乙二胺四乙酸(Ethylene diaminetetraacetic acid)。Taq:水生栖热菌（Thermus aquaticus）。OD:光度密度(optical density)。4　方法提要果实样品直接粉碎离心，果汁样品直接离心，提取沉淀DNA，果干、果酱、蜜饯先用蒸馏水清洗再提取 DNA。以黑加仑果实为阳性对照，以其他水果DNA为阴性对照，无菌水作为空白对照。使用特异性引物探针进行实时荧光PCR扩增，通过实时荧光信号曲线判定是否存在黑加仑成分。5试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂。实验用水符合GB/T 6682的要求。所有试剂均用无 DNA酶污染的容器分装。5.1检测用引物和探针：黑加仑成分扩增引物和探针、内参照（显花植物NADH基因）引物和探针详见表1。黑加仑引物扩增的靶标序列参见附录 A。表1黑加仑序列引物探针扩增片物种名称引物/探针序列（5-3）靶基因段长度 F:G