SNT 1942.2-2007进出口动物源性食品中布鲁氏菌属检验方法 第2部分：PCR检验方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T.1942.2--2007进出口动物源性食品中布鲁氏菌属检验方法第 2 部分：PCR检验方法Detection of Brucella in food from animal for import and export-Part 2 : PCR method2008-03-01实施2007-08-06发布中华人民共和国o.发布素能技S1聘最国家质量监督检验检疫总局数码防伪 SN/T 1942.2—2007前言SN/T1942—2007《进出口动物源性食品中布鲁氏菌属检验方法》分为两部分：第1部分：分离与计数方法；一第2部分:PCR检验方法。本部分为SN/T1942的第2部分。本部分的附录 A和附录B均为规范性附录。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局、中华人民共和国黑龙江出人境检验检疫局。本部分主要起草人：吴斌、郑秋月、贾、李苏龙、李振荣、胡传伟。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T 1942. 2--2007进出口动物源性食品中布鲁氏菌属检验方法第 2 部分:PCR 检验方法1范围SN/T 1942的本部分规定了进出口动物源性食品中布鲁氏菌属PCR检验方法。本部分适用于进出口动物源性食品中布鲁氏菌属的快速检验2规范性引用文件下列文件中的条款通过SN-1942.的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的必威体育精装版版本。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本适用于本部分。GB19489实验室　生物安全通用要求SN/T1942.1进出口动物源性食品中布鲁氏菌属检验方法第1部分：分离与计数方法WS/T 230—2002 临床诊断中聚合酶反应技术的应用3＇生物安全措施为了保护实验室人员的安全，应亩具备资格的工作人员检测布鲁氏菌，所有培养物和废弃物应小心处置。并按照 GB19489 中的有关规定进行。4防污染措施参照WS/T230一2002中第6章进行污染的预防和控制。5术语、定义和缩略语5.1　术语和定义下列术语和定义适用于SN/T1942的本部分5.1.1布鲁氏菌属‧Brucella布鲁氏菌属为一类革兰氏阴性短小球杆菌，可分解葡萄糖等糖类，产酸量少无动力，无芽胞，过氧化氢酶阳性。5. 1.2聚合酶链反应 polymerase chain reaction,PCR使用两段（通常长度为15个～25个核苷酸)寡脱氧核苷酸作为反应的引物，这两段引物序列应不发生互补作用，可以和作为模板的待测DNA两条链上的特定位点分别发生互补。反应液包括含有镁离子的反应缓冲液、4种脱氧核苷三磷酸（dNTP）、模板 DNA、引物及热稳定 DNA聚合酶组成。在DNA聚合酶催化下,通过DNA变性、退火及延伸数十个循环的反复变化而获得两个互补位点之间DNA片段的大量拷贝1 SN/T 1942.2—20075.1.3引物primer应用化学方法合成一对与已知待扩增基因片段两侧 DNA序列互补的寡核苷酸，作为 PCR扩增的引物。5.2缩略语下列缩略语适用于SN/T1942的本部分。5.2.1PCR:polymerase chain reaction(PCR),聚合酶链反应。5.2.2 DNA:deoxyribonucleic acid,脱氧核糖核酸。5.2.3dNTP:deoxyribonucleoside triphosphate,脱氧核苷三磷酸。5.2.4 dATP:deoxyadenosine triphosphate,脱氧腺苷三磷酸。5.2.5dCTP:deoxycytidine triphosphate,脱氧胞苷三磷酸。5.2.6dGTP:deoxyguanosine triphosphate,脱氧鸟苷三磷酸。5.2.7dTTP:deoxythymidine triphosphate,脱氧胸苷三磷酸。5.2.8dUTP:deoxyuridine triphosphate,脱氧尿苷三磷酸。5.2.9 UDG:uracil DNA glycosylase,尿嘧啶 DNA-糖基酶。5.2. 10 bp:base pair,碱基对。5.2.11Taq:Thermus aquaticu,水生栖热菌。5.2.12 Tris:tris(hydroxymethyl)aminomethane,三(羟甲基)氨基甲烷。5.2. 13 TE:Tris-HCI、EDTA 缓冲液。6培养基和试剂除另有规定外，试剂为分析纯或生化试剂，水为灭菌双蒸水。6.1布鲁氏菌肉汤培养基（见第 A.1章）。6.2布氏琼脂（见第 A.2章）。6.3肝浸液培养基