SN_T 3988-2014刺激隐核虫检疫技术规范.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3988—2014刺激隐核虫检疫技术规范Quarantine protocolfor Cryptocaryonirritans2014-11-19发布2015-05-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准刺激隐核虫检疫技术规范SN/T 3988—2014*中国标准出版社出版北京市朝阳区和平里西街甲2号（100029）北京市西城区三里河北街16号（100045）总编室：(010址中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*开本880×12301/16印张0.755字数18千字2016年2月第一版2016年2月第一次印刷印数1--1100*书号：155066·2-29319 SN/T3988—2014前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国福建出入境检验检疫局、中华人民共和国厦门出入境检验检疫局、福建农林大学。本标准主要起草人：王武军、张志灯、张体银、郑腾、陈红燕、白泉阳、郭书林、于师宇、陈学群、江一帆。 SN/T3988—2014刺激隐核虫检疫技术规范1范围本标准规定了鱼类刺激隐核虫的检疫技术规范。本标准适用于鱼类刺激隐核虫病的检疫。2?规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法SC/T7103水生动物产地检疫采样技术规范3概述刺激隐核虫简介参见附录A。4设备、材料和试剂4.1水：GB/T6682中二级水的要求4.2经121℃、15min高压灭菌的海水或3.5%氯化钠溶液，制备方法见B.1。4.30.85%氯化钠溶液。4.41固定液：4%福尔马林、70%酒精。4.5Giemsa染色液，制备方法见B.2。4.6解剖盘。4.7载玻片、盖玻片、培养皿。4.8手术剪、眼科手术镊、解剖针、吸管。4.9体视显微镜。4.10显微镜。4.11普通冰箱。5临床诊断5.1发病症状患病初期，病鱼在水中漫游不止，分布散乱，开口呼吸且频率加快，食欲衰退。患病后期，病鱼离群于水面缓慢游动，食欲废绝；皮肤和鳃上白点愈加明显，体表发炎溃疡，鳍条缺损、开叉，眼角膜混浊发白；病鱼体表、鳃因粘液大量分泌而形成白色混浊薄膜，体表、眼角膜、口腔周围和鳃等与外界接触处可肉眼观察到0.3mm~0.5mm大小的白点，特别是深色皮肤上更容易观察到（参见图C.1），病情严重时体表被一层混浊白膜包裹。1 SN/T3988-20145.2病理变化刺激隐核虫幼虫侵入鱼上皮，随着滋养体的生长发育，上皮层表面逐渐出现肉眼可见的白点，病鱼体表一个位点通常只生长一个虫体，严重感染时可见2～4个虫体共同感染一个位点。严重感染部位可出现上皮渐进性坏死、外层脱落；鳃丝组织显著增生；眼角膜增生，眼球混浊。5.3流行病学刺激隐核虫为世界性分布，由其引起的刺激隐核虫病流行地区很广，海水养殖鱼类中几乎都可发生。从晚春到初秋，水温在20℃～30℃时本病最容易流行。刺激隐核虫在宿主组织内体积增大但不分裂，在宿主体内停留生长3d～4d后便离开宿主，在水底形成包囊。经4d至2周，每个包囊可释放100～300个感染期幼虫，潜人鱼的体表。因此，多数病例在低水平感染后数日内病情加重。5.4初步诊断海水鱼存在皮肤和鳃上出现白点、在水面漫游等上述症状的，可初步诊断为刺激隐核虫病，6样品采集按照SC/T7103的规定进行采样。在水温为20℃～25℃时.海水养殖区网箱中随机抽取样品进行表观健康检查，发现有疑似症状的，采样送实验室检测，优先采集尾鳍或胸鳍出现白点的病鱼，每份样品采集10～20尾。对于外表健康无临床症状的鱼体，适当扩大采样数量。采样后，将样品放人完整、结实的包装容器内，保持样品处于活体状态尽快送达实验室。样品送达实验室后，参照D.1介绍的方法采集虫体。必要时，对采集的虫体参照D.2介绍的方法进行固定后保存。7实验室镜检7.1虫体直接镜检将第6章中采集的虫体或取病鱼全鳃条（选取每边鳃的第一片鳃片接近两端的位置各剪取一小块鳃丝），用高压灭菌海水或3.5%氯化钠溶液制作水封片，在10×4的低倍镜下观察。刺激隐核虫为呈圆形或卵圆形、体色不透明、全身具有纤毛、做缓慢旋转运动的虫体（参见图C.2）。7.2虫体染色镜检刮取体表粘液和取鳃组织样品于装有生理盐水的培养Ⅲ中静置，可发现白色虫体游人水中，用吸管吸取虫体，涂于载玻片上，滴甲醇2～3滴于虫体上，使其固定，在空气中干燥后，用Giemsa染色液染色5min～10min，2～3倍水浸洗2min，晾干后，于显微镜下观察刺