NY_T 2656-2014饲料中罗丹明B和罗丹明6G的测定 高效液相色谱法.pdf

ICS 65.120B 46NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 2656—2014饲料中罗丹明B和罗丹明6G的测定高效液相色谱法Determination of rhodamine B and rhodamine 6G in feeds-High performance liquid chromatography2015-01-01实施2014-10-17 发布中华人民共和国农业部、发布 NY/T 2656—2014前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草本标准由农业部畜牧业司提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76）归口。本标准起草单位：中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所。本标准主要起草人：张妍、杨曙明、邱静、于洪侠、赵小阳。- NY/T2656—2014饲料中罗丹明B和罗丹明6G的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了饲料中罗丹明B和罗丹明6G的高效液相色谱测定法本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料中罗丹明B和罗丹明6G的测定，本标准的定量限为1ug/kg2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件.仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件GB/T603化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样GB/T20195动物饲料试样的制备3方法原理饲料中的罗丹明B和罗丹明6G经过2%三氯乙酸乙睛溶液提取，正已烷脱脂.离心后上清液用氮气吹干.甲醇定容.高效液相色谱测定，外标法定量。4试剂和材料除特殊注明外，所用试剂均为分析纯；水应符合GB/T6682中一级用水规定；溶液按照GB/T603的规定配制。4.1甲醇：色谱纯4.2正已烷：色谱纯4.32%三氯乙酸乙腈溶液：取10g三氯乙酸溶于500ml.乙腈中。4.41%磷酸：取10ml磷酸.用水溶解并稀释至1000ml。4.5罗丹明B和罗丹明6G标准品：纯度≥98%。4.6罗丹明B和罗丹明6G贮备液（1mgml）：分别准确称取罗丹明B和罗丹明6G标准品10mg，用甲醇溶解，定容至10mL。贮备液在一20℃保存.有效期一年。4.7罗丹明B和罗丹明6G标准中间液（1μg/ml.）：分别准确吸取1ml.的罗丹明B和罗丹明6G标准贮备液.用甲醇稀释定容至100ml.2℃～8℃保存.有效期10d。4.8罗丹明B和罗丹明6G标准工作液：吸取适量的罗丹明B和罗丹明6G标准中间液.用甲醇分别配置成0.5ng/ml、1ng/mlL、10ng/ml、50ng/ml.和100ng/ml的混合标准工作液.2℃～8℃保存.有效期10d。4.9滤膜:0.22μm。5仪器和设备5.1高效液相色谱仪：配有荧光检测器。5.2离心机：转速大于10000r/min。1 NY/T2656—20145.3漩涡振荡器。5.4振荡器。5.5分析天平：感量0.00001g。5.6天平：感量0.01g6试样制备按GB/T14699.1抽取有代表性的样品，四分法缩减取样。按GB/T20195的规定制备试样.粉碎.全部通过孔径为0.42mm的试验筛.混匀，装人密闭容器中.避光保存.备用。7分析步骤7.1试样提取称取1g试样（精确至0.01g）.置于25mL离心管中；加人2%三氯乙酸乙腈溶液（4.3）5ml..40℃超声提取30min；加人5ml.正已烷.漩涡振荡1min，在10000r/min下离心5min。将下层乙睛转移至10ml.离心管中，50℃下氮气吹干，用1.0ml甲醇溶解，滤膜过滤后测定。7.2色谱条件色谱柱：C18，柱长150mm，内径4.6mm，粒度5μm，或性能相当者。柱温：30℃。进样量：10μL。流动相：1%磷酸十乙睛=50十50。流速：0.5ml/min。荧光检测器条件：激发波长540nm；发射波长570nm，7.3定量测定分别取适量的罗丹明B和罗丹明6G标准工作液（4.8）及试样溶液（7.1)测定，以色谱峰保留时间定性.以色谱峰面积响应值作单点或多点校准定量。罗丹明B和罗丹明6G标准色谱图参见附录A。8结果计算试样中罗丹明B或罗丹明6G的含量，以质量分数X,计，数值以微克每千克（μg/kg）表示，按式（1)计算：X, = C XA XV(1)A,Xm式中：-试样质量，单位为克（g）；mV-试样溶液的定容体积，单位为毫升（mL）；C，——标准工作液中相应罗丹明B或罗丹明6G的浓度.单位为纳克每毫升（ng/ml.）；A—试样溶液中罗丹明B或罗丹明6G的峰面积；A-——标准工作液中相应罗丹明B或罗丹明6G的峰面积测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留3位有效数字。9重复性在重复性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值不