SBT 10464-2008家畜放线菌病病原体检验方法.pdf

ICS 11. 220B 41SB备案号：24731--2008中华人民共和国国内贸易行业标准SB/T 10464--2008家畜放线菌病病原体检验方法Methods for the exanination of pathogens of actinomycosis in livestocks2008-07-03 发布2008-12-01实施中华人民共和国商务部发布 中华人民共和国国内贸易行业标雅家畜放线菌病病原体检验方法SB/T 10464-2008*中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码：100045网址 www. spc. net. cn电话：6852394668517548中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销*印张 0.5字数 ８千字开本 880×1230 1/162008年9月第一次印刷2008年9月第一版*书号：155066·2-19124由本社发行中心调换如有印装差错侵权必究版权专有1举报电话：（010SB/T 10464--2008前言本标准由中华人民共和国商务部提出并归口。本标准由中华人民共和国商务部屠宰技术鉴定中心负责起草。本标准主要起草人：赵志云、金社胜、郑志明。I SB/T 10464--2008家畜放线菌病病原体检验方法1范围本标准规定了家畜（牛、猪)放线菌病病原体的检验方法。本标准适用于家畜（牛、猪)屠宰加工过程中放线菌病病原体的实验室检验。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的必威体育精装版版本。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本适用于本标准。GB/T 4789.28-2003食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3术语与定义下列术语和定义适用于本标准。3.1放线菌病actinomycosis由放线菌引起的一种人畜共患慢性传染病，以形成特异性肉芽肿和慢性化脓灶、脓汁内含有特殊的菌块(或称“硫磺样颗粒”)为特征，注：本病广泛分布于世界各地，多呈散发性，我国各地均有发生，对畜牧业的发展危害较大，并危害人体健康。家畜中以牛和猪较常见。3.2特异性肉芽肿 specific granuloma放线菌感染引起的局部组织慢性增生性炎症病灶。3.3硫磺样颗粒: suifur granule病灶脓汁中形成的肉眼可见针帽头大小的黄白色小颗粒。4设备和材料4.1 注射器。4.2 试管 16 mmX160 mm。4.3培养Ⅲ直径 90 mm。4.4毛细吸管。4.5手术刀（刀片）。4.6生理盐水。4.7盖玻片。4.8 镊子。4.9切片刀。4. 100玻璃容器。4.11切片机。4. 122载玻片。注：试验前，以上试验器材应灭菌处理。1 SB/T 10464--20084.13光学显微镜。4.14黑纸。4. 155%～10%氢氧化钠。4.16酒精灯。4.17固定液10%中性福尔马林。4.18电热恒温箱：60℃士1℃。4. 19石蜡：熔点52℃～54℃;56℃～58℃。4.20干燥箱:200℃±1℃。4.21蜂蜡。4.22熔蜡及包埋工具。4.23染色缸。55　方法5.1直接压片镜检法5.1.1 取样用灭菌注射器自未破溃的脓肿中或在脓肿切开时抽取脓汁。5.1.2 制片取少量脓汁放人试管中，加人适量无菌生理盐水或灭菌蒸馏水进行稀释，充分振荡，待沉淀后倾去上层液体，再加入少量生理盐水，倒人培养Ⅲ中，将培养皿放在黑纸上，找出硫磺样颗粒，用毛细吸管吸出放在洁净的载玻片上，加1滴10%氢氧化钾溶液，覆以盖玻片，轻轻压平。5.1.3镜检及判定在20×～40×光学显微镜下，菌丝末端膨大，呈菊花状排列，即为放线菌压片镜检阳性。5.2染色镜检法5.2.1取样用毛细管或无菌注射器自未破溃的脓肿或在脓肿切开时抽取脓汁一滴涂于洁净载玻片上，用盖玻片轻轻挤压。5.2.2 固定将涂片在酒精火焰上固定。5.2.3染色采用革兰氏染色，按GB/T4789.28-2003中2.2的规定进行。5.2.4镜检及判定在20 ×～40×光学显微镜下观察，发现菊花状菌丝团块，即为放线菌染色镜检阳性。注：菌丝团块中心为革兰氏阳性的菌丝体,其周围呈放射状排列的革兰氏阴性棍棒体时，为牛放线菌；菌块中心为革兰氏阴性的短小杆菌，其周围的棍棒体亦呈革兰氏阴性，则为林氏放线杆菌。5.3病理组织学检验法5.3.1取样切取正常组织与肉芽肿交界处的组织块，制成大小为0.5 cm×0.5cm×0.2 cm或1.0 cm×1.0 cm×0.3cm、1.5cm×1.5cm×0.5cm一式两份。将切取的病料组织放人10%中性福尔马林固定24 h 以上.5.3.2石蜡切片制作步骤将上述固定好