SNT 2135-2008蜂蜜中转基因成分检测方法 普通PCR方法和实时荧光PCR方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2135—2008蜂蜜中转基因成分检测方法普通PCR方法和实时荧光PCR方法Detection of genetically modified components in honey-Contentional PCR and real-time fluorescence PCR2009-03-16 实施2008-09-04发布中华人民共和国03发布层液表1905国家质量监督检验检疫总局数码防伪 SN/T 2135—2008言前本标准的附录 A和附录 B均为规范性附录本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国北京出入境检验检疫局起草。本标准主要起草人：饶红、冯骞、陈广全、付浦博、曾静、汪琦、张惠媛。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T 2135-—2008蜂蜜中转基因成分检测方法普通PCR方法和实时荧光PCR方法1范围本标准规定了蜂蜜中转基因成分的定性检测方法。本标准中适用于以转基因棉花、转基因油菜等作为蜜源植物采集的蜂蜜或受到转基因作物污染的蜂蜜中的转基因成分的检测。2　规范化引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的必威体育精装版版本。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682-2008,ISO3696：1987,MOD)SN/T 1193基因分析检测实验室技术要求SN/T1194植物及其产品转基因成分检测抽样和制样方法3术语、定义和缩略语3.1术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3. 1. 1聚合酶链式反应polymerase chain reaction,PCR体外酶催合成特异 DNA片段的方法,模板基因序列先经高温变性成为单链,在 DNA 聚合酶作用和适宜的反应条件下，根据模板序列设计的两条引物分别与模板DNA两条链上相应的一段互补序列发生退火而相互结合,接着在 DNA聚合酶的作用下以四种脱氧核糖（dNTP)为底物,使引物得以延伸，然后不断重复变性、退火和延伸这一循环，使欲扩增的基因片段以几何倍数扩增。3. 1. 2实时荧光 PCR real-time fluorescence PCR在 PCR反应体系中加人荧光基团，利用荧光信号积累实时检测整个 PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定性或定量分析的方法。PCR扩增时在加人一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光集团和一个淬灭荧光集团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR 扩增时，Tag 酶的 5-3外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光集团和淬灭荧光基团分离，从而荧光检测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有个荧光分子形成，实现了荧光信号的积累与PCR产物形成完全同步。就是通过对 PCR扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定性的分析。在实时荧光定量PCR反应中，引人了一种荧光化学物质，随着 PCR反应的进行，PCR反应产物不断累计,荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环,收集一次荧光强度信号，这样就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化，从而得到一条荧光扩增曲线图。3.1.3定性检测 qualitative detection对样品中转基因成分进行检测，以判定该样品是否为转基因产品。 SN/T 2135---20083.2缩略语3.2.1下列缩略语适用于本标准。GMO genetically modified organism转基因生物。3.2.2 CaMV 35S 35S promoter from Cauliflower. mosaic virus花椰菜花叶病毒35S启动子。3.2.3 NOS terminator of nopaline synthase gene from Agrobacterium tumefaciens来源于农杆菌的胭脂碱合成酶基因终止子。3.2. 4 CP4 EPSPS 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase gene5-莽草酸-3-磷酸合成酶基因。3.2.5 IVR Invertase 1 gene from maiz玉米转化酶1基因。3.2.6 NptI neomycin-3-phosphotransferase gene新霉素-3-磷酸转移酶基因。3.2.7 CrylA(b):a synthetic gene encoded thrst 648 amino aci