SNT 1135.7-2009马铃薯A病毒检疫鉴定方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1135.7---2009马铃薯A病毒检疫鉴定方法Quarantine identification of Potato virus A2010-03-16 实施2009-09-02 发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局气 中华人民共和国出人境检验检疫行业标准马铃薯A病毒检疫鉴定方法SN/T 1135. 7—2009中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码：100045网址 www.spc. net. cn电话：6852394668517548中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*开本 880×12301/16印张 0.75字数 14 千字2010年1月第一版2010年1月第次印刷印数1—2 000*书号：155066·2-20144 SN/T 1135.7—2009前言本标准的附录 B、附录 C、附录 D为规范性附录,附录 A 为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准由中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院负责起草。本标准主要起草人：王秀芬、李明福、刘伟、高志方、刘善斌、周铭。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。 SN/T 1135.7—2009马铃薯A病毒检疫鉴定方法1范围本标准规定了进境植物检疫中对马铃薯 A病毒的检疫鉴定方法本标准适用于所有进境种薯、商品用薯、组培苗和脱毒苗等马铃薯种质中马铃薯A病毒的检疫鉴定。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的必威体育精装版版本。凡是不注日期的引用文件,其必威体育精装版版本适用于本标准。SN/T2122进出境植物及植物产品检疫抽样3原理3.1学名与分类地位学名:Potato virus A缩写:PVA分类地位：马铃薯 Y病毒科（Potyviridae)马铃薯Y病毒属（Potyvirus）。3.2 检疫鉴定依据马铃薯 A 病毒的血清学特性分子生物学特性和生物学特性是检疫鉴定的主要依据。其他资料参见附录 A。4仪器设备、用具及试剂4.1仪器设备酶联检测仪、天平（感量，1/10000g）、pH计、微量榨汁机、PCR仪、电泳仪、电泳槽、凝胶成像系统、隔离温室、恒温水浴、低温冰箱等）酶联板、研钵、eppendorf管、花盆、消毒微量移液器(2 μL,10 μL,20 μl100 μL,200,μL,1 00d μ土等。4.2试剂酶联免疫吸附测定试剂（见附录 B)、RT-PCR检测试剂（见附录 C)。5样品制备抽样按照SN/T2122的规定执行。将马铃薯块茎种植在隔离温室中，于 25℃生长并进行症状观察。待长出 3片～4 片叶后将表现症状的植株编号,未表现症状的植株分组(10 株为 1组)并编号。采集的叶片进行酶联免疫测定、RT-PCR检测或生物学测定。6检测方法6.1 酶联免疫吸附测定见附录 B。 SN/T 1135. 7-20096.2RT-PCR 检测见附录 C。6. 3生物学测定见附录 D。7结果判定酶联免疫吸附测定为阳性,RT-PCR 检测或生物学测定亦为阳性，可判定待检样品带有马铃薯 A病毒。8样品保存8.1样品保存经检验确定携带马铃薯 A病毒的样品应在合适的条件下保存,种子保存在 4℃，病株在一20℃或者一80℃冰箱中保存，做好标记和登记工作。8.2结果记录与资料保存完整的实验记录包括：样品的来源、种类、时间，实验的时间、地点、方法和结果等，并要有经手人和实验人员的签字。酶联测定需有酶联板反应的原始数据,RT-PCR检测需有电泳结果图片，生物学测定需有鉴别寄主的症状照片。2 SN/T 1135. 7-2009附录A(资料性附录)马铃薯A病毒相关资料A.1 寄主范围PVA的自然寄主只有马铃薯(Solanum tuberosum）。A.2 病害症状初侵然和次生侵然症状无明显差异，有时可引起中度褪绿，黄或灰绿的不规则区域与深绿区域交织。斑驳区域形状不同,位于脉上和脉间。叶片常变亮,并有波状区,在日照充分的季节,其症状没有在冷凉气候下明显，有时甚至完全隐症。该病毒在田间的症状不明显，天气炎热、干旱季节,很难识别。A.3分布地区日本、巴基斯坦、欧洲各国、美国、新西兰。A.4　传播方式汁液接种虽可传播病毒，但实际接种不易成功。马铃薯薯块可持久带毒。传毒介体蚜虫（Aphisfrangulae、A.nasturti、Myzus persicae)可作非持久传播。当毒源植物含有马铃薯 A病毒时，介体蚜虫还可传播马铃薯奥古巴花叶病毒（potatoaucuba mosaic virus）。 SN/T 1135.7—2009附录B(规