SN_T 3926-2014出口乳、蛋、豆类食品中蛋白质含量的测定 考马斯亮蓝法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3926—2014出口乳、蛋、豆类食品中蛋白质含量的测定考马斯亮蓝法Determination of protein content in dairy foods , egg foods and soy foods for export--Coomassie brilliant blue method2014-11-01实施2014-04-09发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T言本标准按照GB/T 1.1一2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国镇江出人境检验检疫局。本标准主要起草人：赵云霞、李平、周洪斌、朱金连、吴小华、王祖翔、孙莉、余杨、沈波、万荣、王慧。I SN/T 3926---2014出口乳、蛋、豆类食品中蛋白质含量的测定考马斯亮蓝法1范围本标准规定了出口乳、蛋、豆类食品中蛋白质含量的考马斯亮蓝测定方法。本标准适用于乳、蛋、豆类食品中蛋白质含量的测定。2　方法提要考马斯亮蓝G-250在稀酸溶液中与蛋白质结合后变为蓝色,其最大吸收波长从465nm变为595nm，其蓝色蛋白质染料复合物在595nm波长下的吸光度与蛋白质含量成正比。3试剂和材料除另有规定外，试剂均为分析纯，水为蒸馏水。3.1 乙醇(95%)。3.2 磷酸(98%)。3.3考马斯亮蓝 G-250。3.4考马斯亮蓝G-250溶液：称取约100mg考马斯亮蓝G-250,溶于50mL 95%的乙醇后，再加人100 mL 85%的磷酸,用水稀释至 1 L,滤纸过滤。3.5标准物质：牛血清白蛋白(BSA),纯度大于等于99.0%。3.6牛血清白蛋白(BSA)标准溶液：精确称取牛血清白蛋白 50 mg，加水溶解并定容至500:mL，配制成 0.1 mg/mL的蛋白质标准溶液。4仪器和设备紫外可见分光光度计：波长范围：190 nm～900 nm。4.14.2天平：感量0.0001g和0.001g。4.3超声波清洗器。4.4　离心机：转速不低于4000 r/min。4.5²具塞离心管:10 mL。4.6食物粉碎机。5 测定步骤5.1样品处理5.1.1液体试样称取混匀试样1g(精确至0.001g)于100mL容量瓶，用水定容至刻度。取部分溶液于4000r/min离1 SN/T 3926—2014心15 min，上清液为试样待测液。5.1.2固体、半固体试样称取粉碎匀浆后的试样1g（精确至0.001g），用80mL水洗人100mL容量瓶，超声提取15min。用水定容至刻度，取部分溶液于4 000 r/min离心15 min，上清液为试样待测液。5.2测定5.2.1标准曲线的绘制分别吸取蛋白质标准溶液 0.0 mL,0.03 mL,0.06 mL,0.12 mL,0.24 mL,0.48 mL,0.72 mL,0.84 mL,0.96mL于10mL的比色管中（以上各管蛋白质含量分别为Q,0.003,0.006,0.012,0.024,0.048,0.072，0.084,0.096 mg),分别加人蒸馏水1.0.mL,0.97 mL,0.94mL,0.88.mL,0.76 mL,0.52 mL,0.28 mL,0.16mL，0.04mL，再分别加人5mL,考马斯亮蓝G-250溶液；振荡混勾，静置2min。用1cm比色池以试剂空白为参比液或调零点，用分光光度计于波长595nm.处测定吸光度（应在出现蓝色2min～1h内完成），以吸光度为纵坐标、标准蛋白质浓度（mg/mL)为横坐标绘制标准曲线。i:5.2.2试样测定吸取0.5mL试样待测液（根据样品中蛋白质含量，可适当调节待测液体积），置于10mL比色管中,加0.5 mL蒸馏水，再加5 mL考马斯亮蓝 G-250溶液,振荡混匀,静置 2 min。用1 cm 比色池以试剂空白为参比液或调零点，用分光光度计于波长.595.nm.处测定吸光度（应在出现蓝色2min～1h内完成），根据标准曲线计算出样品中蛋白质含量。6结果计算和表述按(1)式计算试样中蛋白质的含量。(c co) XVMXX 100(1)m X 1 000a式中:+一试样中蛋白质的含量，单位为克每百克（g/100g）；-从标准工作曲线得到的蛋白质浓度,单位为毫克每毫升(mg/mL);空白试验中蛋白质浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）CoV一最终样液的定容体积，单位为毫升(mL）;-测试所用试样质量，单位为克（g）。m计算结果保留到小数点后两位。7精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。2 中华人民共和国出人境检验检疫行业标准出口乳、蛋、豆类食品中蛋白质含量的测定考马斯亮蓝法SN/T 3926