SNT 1700-2006动物皮毛炭疽Ascoli反应操作规程.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1700—2006动物皮毛炭疽Ascoli反应操作规程Protocol of Ascoli test for anthrax in hide and wool2006-01-26 发布2006-08-16 实施中华人民共和国发布数码防伪国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1700—2006言前本标准的附录 A为规范性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国广东出人境检验检疫局。本标准主要起草人：梁刚、林志雄、鱼海琼、陈茹、刘琳琳。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T 1700—2006动物皮毛炭疽Ascoli反应操作规程1 范围本标准规定了动物皮张、原毛中炭疽的阿斯科利试验(Ascoli test)检测方法。本标推适用于动物皮张、原毛炭疽抗原检验。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的必威体育精装版版本。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本适用于本标准。GB/T6682‘分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3.1阿斯科利试验Ascoli test.以抗血清作为沉淀素检测动物组织中炭疽抗原的一种沉淀试验。4材料4.1器材高压消毒器,50 μL～200 μL单通道移液器，普通冰箱，浸样瓶，反应管，显微镜，超净工作台，恒温培养箱,革兰氏染色液。4.2皮(毛)样浸液配制方法见附录 A。4.3诊断试剂4.3.1炭疽沉淀素标准抗原：炭疽杆菌粉抗原，用于阳性和阴性对照试验，由指定单位提供。4.3.2炭疽沉淀素阳性血清：用于样品检测及阳性对照试验,检测盐渍皮时应加人4%的氯化钠，由指定单位提供。4.3.3炭疽阴性血清：用于阴性对照试验，由指定单位提供。5样品采集和处理5.1样品采集被检皮张、原毛应存放在专用仓库和指定的地方，不同批次的皮张、原毛严格分开存放。每批放在一处，每张皮张编号，原毛独立包装编号。在每张皮的腿部或腋下抹取样皮一块约2g，原毛在各独立包装取样3g，若无独立包装则在分散的20个以上不同点各取样3g。样皮、样毛应装人专用的密封金属盒或耐高温防水样品袋中，并按原有号码编号。5.2样品处理5.2.1样品消毒将检验样本连同样品袋一起放人高压灭菌器，103kPa121℃消毒30 min。冻皮、湿皮、鲜皮应在高1 SN/T 1700—2006压消毒前置室温 48 h。5.2.2被检样本制备将经高压消毒的皮样去除脂肪，5个被检皮样放到1个浸样瓶中，1个被检毛样放到1个浸样瓶中，并记录样品编号和相对应的浸皮瓶编号。按质量：体积一1：10的比例加入皮（毛)浸液（见附录A)至浸样瓶，使样本在室温下浸泡16 h～24 h后，用中性定量滤纸滤过浸液，其澄清液为被检样本，待检。6正式试验6. 1 试验温度试验应在15℃～30℃的条件下进行。6.2 对照试验6.2.1炭疽沉淀素阳性血清对照试验在一支加有100μL～200μL 1：5000标准炭疽抗原的反应管中,徐徐加入等量的炭疽沉淀素阳性血清,抗原液面与血清接触面必须清楚。15min内判定结果。6. 2. 2 炭疽阴性血清对照试验在-支加有100μL～200,μL的标准炭疽抗原反应管中,徐徐加人等量的 1：5 000 炭疽阴性血清，抗原液面与血清接触面必须清楚。15 min 内判定结果。6.3被检样品试验6.3.1 反应管中加入 100 uL～200 μL的炭疽沉淀素阳性血清,试验反应管。同时另取一反应管加人等量的1：5000炭疽阴性血清，作阴性血清对照反应管。6.3.2将等量被检皮(毛)样抗原徐徐加人到试验反应管和阴性血清对照反应管中，使之形成清晰的界面。也可使用两侧有毛细小孔的反应管，将含有炭疽沉淀素阳性血清的反应管放入浸样瓶中，被检样本抗原通过两侧的毛细孔沿管壁流到管中，与炭疽沉淀素阳性血清形成清晰的界面。15 min 内判定结果。7 结果判定炭疽沉淀素阳性血清对照试验7. 1 两界面出现清晰、致密的白色沉淀环。7.2炭疽阴性血清对照试验两界面无白色沉淀环出现。7.3被检样品试验阴性血清对照反应管；应呈阴性反应，两界面无白色沉淀环出现。7.3.1F当对照试验成立时，方可判定反应结果。7.3.2阴性反应：反应管中阳性血清与被检样品浸泡液间界面清晰，并且没有出现白色沉淀环。7.3.3F阳性反应：反应管中阳性血清与被检样品浸泡液间界面清晰并且出现致密、明显的白色沉7.3.4淀环。可疑：当反应管中阳性血清与被检样品浸泡液间界面清晰，并出现模糊、疏松、不明显的白色沉7.3.5淀环时，则可初步判定反应结果为可