WST 40-1996尿中2-硫代噻唑烷-4-羧酸的高效液相色谱测定方法.pdf

中华人民共和国卫生行业标准尿中2-硫代噻唑烷-4-羧酸的WS/T40--1996高效液相色谱测定方法Urine--Determination of 2-thiothiazolidine-4-carboxylic acid-High performance liquidchromatographic method1主题内容与适用范围本标准规定了尿中2-硫代噻唑烷-4-羧酸的高效液相色谱测定方法。本法最低检测浓度为8μg/L。本标准适用于接触二硫化碳工人尿中TTCA的测定。2原理尿样经盐酸酸化后，TTCA被乙醚萃取，经高效液相色谱反相C1g柱分离，紫外检测器273nm检测。保留时间定性，峰高定量。3仪器3.1高效液相色谱仪，紫外检测器。3.2电热恒温水浴。3.3液体快速混匀器。3.4微量注射器，20uL。3.5移液管,1ml,5 mL。3.6容量瓶，100mL。3.7具塞试管，10mL。3.8聚乙烯塑料瓶，100mL。3.9尿比重计。4试剂本法所用试剂除另有说明外，均为分析纯试剂。4.1实验用水，去离子水经全玻璃蒸馏器重蒸馏后，加盖保存。4.2盐酸，P20=1.19g/mL。4.3冰乙酸，P2o=1.05g/mL。4.4甲醇，优级纯或经重蒸馏的分析纯试剂。4.5乙醚，使用新的试剂，否则临用前须经中性氧化铝柱除去过氧化物。4.6盐酸溶液，2mol/L。4.7TTCA(2-硫代噻唑烷-4-羧酸）：制备方法见附录A。1997-05-01实施中华人民共和国卫生部1996-10-14批准 WS/T 40-19964.8TTCA标准溶液：准确称取40.0mgTTCA（4.7），于100mL.容量瓶中，用水稀释至刻度。此溶液1mL=400μgTTCA。再将其用水稀释10倍，浓度为1mL=40μgTTCA。置4℃冰箱可保存两周。4.9质控样：用加标的模拟尿、接触者混合尿或加标的正常人混合尿作质控样。5采样、运输和保存用聚乙烯塑料瓶采集约50mL班末尿，尽快测定比重后，于常温下运输；但夏季运输需要冷藏，于一8℃下可保存一周。6分析步骤6.1仪器操作条件6.1.1色谱柱：反相C18键合硅胶柱。6.1.2流动相：甲醇+水+冰乙酸=14.5+84.5+1；流速：1.5mL/min。6.1.3紫外检测波长：273nm。6.2空白试验用正常人混合尿样按6.3条处理、6.5条测定。6.3样品处理取1mL经离心后的尿样置于具塞试管中，加入0.1mL盐酸溶液（4.6）及5mL乙醚，于液体快速混匀器上振摇2min。于3000r/min离心10min后，将乙醚溶液全量转移至另一试管中，置40℃水浴上吹氮至干，加入200uL甲醇溶解残渣。6.4标准曲线的绘制取5支具塞试管，按下表配制标准管。TTCA标准管的配制管号12345TTCA标准溶液（4.8），mL0. 10. 20. 30. 40. 5水,mL0. 40. 30. 20. 10TTCA含量,μ上述标准管中溶液各20μL，进HPLC测定。以TTCA含量（μg）为横坐标，色谱峰高为纵坐标，绘制标准曲线。6.5样品测定取经6.3条处理的样品液20uL，进HPLC进行测定。同时测定空白样（6.2）。其色谱图见下图。在测定前后及每测定10个样品后，测定一次质控样。 WS/T 40--1996TTCA0510minTTCA接触者尿样色谱图7 计算7.1按式(1)计算尿样换算成标准比重(1.020)下浓度的校正系数k。1.020-1.000k(1 )实测比重-1.0007.2按式(2)计算尿中TTCA的浓度。X= 10 ×c·k(2)式中: X—尿中 TTCA浓度,mg/L;一从标准曲线查得的TTCA浓度，μg/20μL。8说明8.1本法检测限0.8ng,取尿样1 mL时，最低检测浓度为8μg/L。线性范围：0~8mg/L。精密度：CV=0.52%～3.3%(TTCA含量0～0.8μg，n=12)。准确度：现场样品加标回收率=78.0%～91.0%(TTCA 本底浓度为1.73~2.84mg/L,加标浓度为 2~16 mg/L,n=2)。8.2对接触者应取班末尿分析。取样前工人须脱离工作场所，洗净手，以防样品污染。8.3影响测定的因素8.3.1本法将离心的尿样经乙醚提取后再次离心，使乙醚层便于分离、转移，从而保证了分析的准确度。8.3.2本法将国外文献的梯度洗脱条件改为等度洗脱，在色谱仪只有一个泵的情况下亦可使用，便于在国内推广。亦可采用两种流动相切换洗脱（A液：甲醇+冰乙酸+水=0.5十95十4.5；B液：甲醇+冰乙酸+水=95+0.5+4.5），洗脱顺序：0~3.5min，A洗脱；3.5~6.5min，B洗脱；6.5~10min，A洗脱。切换洗脱可使尿中杂质较快流出，同时亦适于单泵操作。8.3.3