SN_T 3536-2013出口食品中酸性橙Ⅱ号的检测方法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3536-—2013出口食品中酸性橙开号的检测方法Determination of Acid Orange I in foods for export2013-03-01发布2013-09-16 实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局0茶层香直# SN/T 3536—2013前言本标准按照GB/T 1.1一2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国广东出人境检验检疫局。本标准主要起草人：魏国彬、蔡璇、李达S1 SN/T 3536-—2013出口食品中酸性橙Ⅱ号的检测方法1 范围本标准规定了出口食品中酸性橙Ⅱ号的高效液相色谱测定方法。本标准适用于饮料、红酒、辣椒酱、黄鱼和卤肉类食品中酸性橙IⅡI号的检测。2原理样品经乙醇-氨溶液提取，用氨基阴离子交换固相萃瑕柱净化.反相高效液相色谱-二极管阵列检测器进行色谱分析，采用外标法定量。试剂和材料3除非另有规定，仅使用分析纯试剂3.1甲醇：色谱纯。3.22%甲酸水溶液：取2 ml.甲酸，用水定容至-100-ml3.310%氨水甲醇溶液：取10ml.氨水，用甲醇定容至100ml7用水定容至100ml，摇匀后备用。3.4乙醇-氨溶液:取 20 ml氨水,加人 78mll乙醇，3.50.02mol/1.乙酸铵溶液：准确称取1.54g乙酸铵，加水至1000ml,溶解，经0.45μm滤膜过滤。mg,3ml,或相当者。使用前依次用3mL甲醇、3ml.2%甲酸3.6氨基阴离子交换固相萃取柱：50g水溶液活化。3.7酸性橙Ⅱ号标准备液：准确称取酸性橙1号10/0mg（纯度≥95%）.用水溶解后定容至100ml，配成100gml的标准备液。3.8酸性橙I1号标准工作液：分别吸取适量标准爬备液用水依次稀释成浓度为0.1ug/mL、0.2μg/ml、0.5 ug/mlL、1.0 μg/mL、10.0 μg/mL的标准工作液.贮存于 4℃冰箱中。4仪器和设备高效液相色谱仪：配有二极管阵列检测器（DAD)。4.14.2分析天平：感量0.000１g和0.０１g。4.3超声波清洗器。4.4离心机：转速不低于5000r/min。4.5旋转蒸发仪。4.6氮吹仪。4.7固相萃取装置。4.8涡旋混合器。4.90.45μm水相滤膜。1 SN/T 3536—20135试样制备与保存将液体、浆状样品混合均匀，固体样品需磨细。贮藏在冰箱中的试样，应在试验前预先取出，并恒温至室温。6样品处理6.1提取6.1.1液态试样准确称取样品10g（精确至0.01g）（如含有乙醇需水浴加热除去乙醇后再用水定容至原体积）于25 ml.容量瓶中，用水定容至刻度，混匀,过0.45 μm滤膜后，待测。6.1.22固态试样准确称取已粉碎样品2g（精确至0.01g），加乙醇-氨溶液（3.4)20ml，超声波提取30min，再振荡提取10min后，以不低于5000r/min的转速离心10min，重复提取一次，合并上清液，浓缩约至10ml.混勾后待净化。6.1.3　净化将6.1.2中的待净化液转移至固相萃取柱（3.6)中。依次用3ml.甲酸水溶液、3ml甲醇溶液淋洗，用6mL氨水甲醇溶液（3.3)洗脱。整个固相萃取过程流速控制在5mL/min之内。收集洗脱液。氮吹至近干,加水定容至2 mL，涡旋混合 1 min,过0.45 μm滤膜后，待测。7　测定7.1液相色谱参考条件液相色谱参考条件如下：a）色谱柱：C1s柱,250mmX4.6mm,粒径为5μm或相当型号色谱柱;b）流动相:甲醇：乙酸铵(0.02 mol/1.)=65：35;c）检测波长：484nm；d）流速:l mL/min;e）i进样体积：10 uL;f）柱温:室温。7.2液相色谱测定在上述色谱条件下，准确吸取标准工作液（3.8)及试液，在7.1色谱条件下分别进样，得到标准工作液和试液中酸性橙Ⅱ号的峰面积，外标法定量，同时做空白。酸性橙ⅡI号标准物质典型色谱图参见附录A。7.3平行试验按照以上步骤对同一试样进行平行试验测定。2 SN/T 3536—20137.4空白试验除不加试样外，均按上述测定步骤进行。结果计算8按式(1)计算样品中酸性橙Ⅱ号的含量。计算结果需扣除空白值。A, XCstd XVXfX=.(1)Astd Xm式中:X样品中酸性橙Ⅱ号的含量，单位为毫克每干克（mg/kg）；A.试样溶液中酸性橙ⅡI号的峰面积；标准工作液中酸性橙II号的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL)；CstdV溶解试样或浓缩后所定容的体积，单位为毫升（mL）；稀释因子;fAstd 一标准工作液中酸性橙Ⅱ号的峰面积;试样的称样量，单位为克（g)。m9测定低限(LOD)本方法酸性橙 IⅡI 号的测定低限(LOD)