SNT 1941.2-2007进出口食品中乳酸菌检验方法 第2部分：PetrifilmTM测试片法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1941.2-2007进出口食品中乳酸菌检验方法第2部分:PetrifilmTM测试片法Detection of lactic acid bacteria in food for import and export-Part 2 : PetrifilmTM enumeration method2008-03-01实施2007-08-06 发布中华人民共和国技段1865毒直访真访发布国家质量监督检验检疫总局数码防伪 SN/T 1941.2-2007創言前 SN/T1941《进出口食品中乳酸菌检验方法》分为三个部分：第1部分：分离与计数方法；-第2部分：PetrifilmTM测试片法；第3部分：乳酸杆菌的PCR法。本部分为SN/T1941的第2部分。本部分的附录 A为规范性附录。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局、中华人民共和国黑龙江出人境检验检疫局。本部分主要起草人：吴斌、秦成、王玫、李苏龙、王刚、齐震玉。本部分系首次发布的出人境检验检疫行业标准。I SN/T 1941.2—2007进出口食品中乳酸菌检验方法第 2部分：PetrifilmTM测试片法1范围SN/T1941的本部分规定了乳酸菌的PetrifilmTM测定方法。本部分适用于天然或添加乳酸菌的食品及原料中乳酸菌的测定。2　术语和定义下列术语和定义适用于 SN/T1942. 1PetrifilmTM细菌总数测试片（用手乳酸菌检测aerobic count plates（used for lactic acidbateria testing-种预先制备好的培养基系统，含有标准的培养，冷水可溶性的凝胶剂和氯化三苯四氮唑（TTC)指示剂，可增强菌落计数效果。用 MRS肉荡制备好释品后，在微需氧条件下培养后可以对乳酸菌进行计数。3设备和材料3.1培养箱：36℃±1℃和25℃±1℃3.2微量移液器1000μL。3.3微需氧培养设备：最佳微需氧条件为氧化碳和8%氮气。可用具双相压力计的微需氧培养箱、厌氧罐、蜡烛缸、气袋或可代用的装置3.4 天平:量程2 kg,感量 0.1 g。3.5灭菌样品处理器具：吸管、取样开罐器3.6样品稀释瓶:500mL样品稀释3.7 压板。4培养基和试剂除另有规定外，试剂均为分析纯或生水为蒸馏水4.1磷酸盐缓冲液（见第A.1章）。4.2MRS肉汤（见第A.2章）。4.3PetrifilmTM细菌总数测试片。5检验方法5.1方法提要PetrifilmTM是-一种用于乳酸菌计数的可再生水合物的干膜，它由上下两层薄膜组成，下层的聚乙烯薄膜上印有网格并且覆盖有乳酸菌生长所需的培养基，上层是聚丙烯薄膜。使用时只需接种1 mI待测样品的稀释液在下层的培养基上，盖上上层的聚丙烯薄膜，此时聚乙烯层上的培养基由于水的作用生成水合物,适合乳酸菌生长。PetrifilmTM测试片是采用 TTC(氯化三苯四氮唑)作为菌落指示剂，可对食品中存在的乳酸菌进行计数。 SN/T 1941.2—20075.2检验程序乳酸菌的检验程序见图1。检样制备样品匀液做成几个适当倍数的稀释液选择2个～3个适宜稀释度，制备MRS混合均液后各取1mL分别加入Petrifilm压板放置中央处，轻压静置至少1 min培养计数／确认各测试片菌落计算乳酸菌结果报告乳酸菌的检验程序图 1 6操作步骤6.1检测样品的制备6.1.1样品的全部制备过程均应遵循无菌操作程序：6.1.2冷冻样品应在2℃～5℃条件下解冻，时间不超过18h，也可在温度不超过 45℃的条件解冻，时间不超过 15 min。6.1.3液体样品应先将其充分摇匀。6.1.4表面取样的样品（如拭子、胶带)等应立即进行检测。6.2样品匀液的制备6.2.1固体和半固体食品：以无菌操作称取25g样品放人装有225mL磷酸盐缓冲稀释液或0.85%生理盐水的无菌均质杯内，于8 000 r/min～10000 r/min均质1 min～2min，制成1：10样品匀液;或放人225mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min制成1：10的样品匀液。6.2.2液体样品：以无菌吸管吸取样品25mL放人装有225mL稀释液的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中，充分振摇，制成1：10的样品匀液。6.2.3表面取样的样品按一定的比例制成1：1样品匀液和(或)1：10样品匀液。2 SN/T 1941.2-20076.2.4用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1：10样品匀液1.0mL,沿管壁缓慢注于装有9mL.稀释液的无菌试管中（注意吸管尖端不要触及稀释液），振摇试管或换用一支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1：100的样品匀液。6.2.5另取1