SN_T 0535-2016进出口饲料中棉酚的测定.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 0535—2016代替 SN 0535-1996进出口饲料中棉酚的测定Determination of gossypol in feed for import and export2017-03-01实施2016-08-23 发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 0535--2016前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规划起草。本标准代替SN0535-1996《出口饲料中棉酚检验方法液相色谱法》。与SN0535-1996相比，除编辑性修改外主要技术变化如下：增加了确证方法；一技术指标满足多种基质和限量要求。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由中华人民共和国国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国浙江出人境检验检疫局检验检疫技术中心，中华人民共和国上海出人境检验检疫局。本标准主要起草人：张文华、黄超群、邹学权、陈玲玲、于卓然、童恺、陈丽、汤杭燕。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：-SN 0535---1996。1 SN/T 0535—2016进出口饲料中棉酚的测定1　范围本标准规定了饲料中棉酚的两种测定方法，高效液相色谱法（HPLC法）和液相色谱-质谱/质谱法(LC-MS/MS 法)。本标准适用于棉籽饼（粕）、猪饲料和鸡饲料中棉酚的定量测定；液相色谱-质谱/质谱法的定量确证。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682　分析实验室用水规格和试验方法3‧第一法　高效液相色谱法(HPLC法)3.1原理试样用丙酮水溶液提取，过滤膜，用高效液相色谱测定，外标法定量。3.22试剂和材料除特殊注明外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。3.2.1丙酮：色谱纯。3.2.2甲醇：色谱纯。3.2.3磷酸。3.2.4丙酮-水溶液（70十30，体积比）：准确量取70mL丙酮（3.2.1）和30mL水，混匀后备用。%磷酸溶液：1 ml磷酸溶解水中,并定容至1I，混匀过滤（0.45 μm)后备用。3.2.6棉酚标准品：CAS:303-45-7,纯度为90.5%。3.2.7棉酚标准储备液：准确称取10mg（精确至0.1 mg)棉酚标准品于 10 mL容量瓶中，用丙酮（3.2.1)溶解并定容至刻度，配制成浓度为1mg/mL的标准储备溶液，于4℃避光保存。3.2.8微孔滤膜:0.22 μm,有机系。3.3仪器和设备3.3.1高效液相色谱（HPILC)仪：配有紫外检测器。3.3.2电子天平：感量为0.01g和0.0001g3.3.3离心机:转速不低于 4000 r/min。3.3.4振摇仪：转速不低于300r/min。3.3.5涡旋混匀器。3.3.6塑料离心管：50 mL。3.3.7研钵。 SN/T 0535—20163.4试样处理称取5g(精确至0.01g)试样于50m离心管中，加入10m水浸泡1h，加人丙酮（3.2.1)至30 mL，振摇20 min。离心5 min后，将上清液转移至 50 mL棕色容量瓶中，用10 ml丙酮-水溶液（3.2.4)重复提取两次，用丙酮-水溶液（3.2.4）定容至50mlL。静置5min，取上清液过微孔滤膜(3.2.8),供 HPLC测定。3.5高效液相色谱测定3.5.1HPLC参考条件HPLC参考条件如下：色谱柱：C18柱,250mm×4.6 mm（内径）,粒径5.0 μm,或功能相当者。a)b)流动相：甲醇（3.2.2）-磷酸溶液（3.2.5）（88+12，体积比），混匀。c)流速:1.5 mL/min。d)波长:238 nm。e)柱温:25℃。f)进样量：10 μL。3.5.2标准曲线绘制用丙酮(3.2.1)将棉酚标准储备液逐级稀释得到的浓度为1 μg/mL、2 μg/ml、4μg/mL、6 μg/mL、10 μg/mL的标准工作液，浓度由低到高进样检测，以峰面积-浓度作图，得到标准曲线回归方程。棉酚的标准品色谱图参见附录A中图 A.1。3.5.3定量测定待测样液中棉酚的响应值应在标准曲线线性范围内，超过线性范围则应稀释后再进样分析。3.5.4空白试验除不称取试样外，均按上述测定条件和步骤进行。3.5.5结果计算试样中棉酚的含量由色谱数据处理软件或按式（1)计算获得：C×V×1 000X=.(1)m X 1 000式中：X—试样中棉酚的含量,单位为毫克每千克（mg/kg）;C一一从标准工作曲线得到的棉酚溶液浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）;V一一样液最终定容体积,单位为毫升(mL）;最终样液代表的试样量