SN_T 0764-2011新城疫检疫技术规范.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 0764—2011代替 SN/T 0764-1999,SN/T 1109—2002,SN/T 1110—2002,SN/T 1686-2005新城疫检疫技术规范Quarantine protocol for newcastle disease2011-12-01实施2011-05-20 发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 0764--2011前言本标准按照GB/T 1.1一2009给出的规则起草。本标准代替SN/T0764一1999《出口家禽新城疫病毒检验方法》、SN/T1686--2005《新城疫病毒中强毒株检测方法荧光RT-PCR法》、SN/T1109—2002《新城疫微量红细胞凝集抑制试验操作规程》和SN/T1110-—2002《新城疫病毒分离及鉴定方法》。本标准与 SN/T 0764—1999、SN/T 1109—2002、SN/T1110—2002和 SN/T 1686-2005相比，主要技术变化如下：一增加了临床诊断;-增加了反转录-聚合酶链反应(RT-PCR);-删除了毒力测定的鸡胚平均致死时间（MDT)和静脉致病指数（IVPI）。本标准修改采用 OIE《陆生动物诊断试验和疫苗手册》（2009版）（Manual of Diagnostic Tests andVaccines for Terrestrial Animals)中第 2. 3. 14 章。本标准与OIE第2.3.14章相比，主要技术差异如下：一本标准完全采用了OIE规定的病原分离与鉴定、血凝和血凝抑制试验方法;-本标准增加了OIE中提及但没有详细操作规程的反转录-聚合酶链反应、荧光反转录-聚合酶链反应的具体试验步骤；-本标准删除了OIE中提及但没有详细操作步骤的酶联免疫吸附试验。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国珠海出人境检验检疫局、中华人民共和国上海出人境检验检疫局、中华人民共和国北京出人境检验检疫局、中华人民共和国江苏出人境检验检疫局、中华人民共和国山东出入境检验检疫局、中华人民共和国广东出人境检验检疫局、中华人民共和国内蒙古出人境检验检疫局。本标准主要起草人：徐海聂、胡永强、罗宝正、谷强、张常印、薄清如、廖秀云、王云华、沙才华、管恩平、邱阳、朱广勤、王海艳。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：-SN/T 0764—1999;-SN/T 1109—2002;-SN/T 1110--2002;SN/T 1686--2005。1 SN/T 0764—2011新城疫检疫技术规范1范围本标准规定了禽类新城疫的临床诊断、病毒分离与鉴定、血凝和血凝抑制试验、反转录-聚合酶链反应、荧光反转录-聚合酶链反应的操作规程。本标准适用于进出口禽类及其产品中新城疫的检疫。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3临床诊断3.12发病症状新城疫简介参见附录A。当禽出现以下部分或全部情形时，可作为初步诊断的依据之一：a）发病急，死亡率高；b）体温升高，极度精神沉郁，呼吸困难，食欲下降：c）粪便稀薄，呈黄绿色或黄白色；d)出现扭颈、翅膀麻痹等神经症状；e)免疫禽群出现产蛋下降。3.2 病理变化当禽出现以下肉眼可见的病变时,可作为初步诊断定性的依据之一全身粘膜和浆膜出血，以呼吸道和消化道最为严重；a）b）腺胃粘膜水肿,乳头和乳头间有出血点；c）盲肠扁桃体肿大、出血、坏死；d）十二指肠和直肠粘膜出血,有的可见纤维素性坏死病变;e）脑膜充血和出血，鼻道、喉、气管粘膜充血、偶有出血，肺可见淤血和水肿。当禽出现上述病变时,应进行实验室确诊。4实验室诊断4.1 病毒分离与鉴定4.1.1设备、材料和试剂器材：生物安全柜、离心机、V型微量血凝板、微量可调移液器、恒温箱等。1 SN/T 0764—20抗生素：青霉素、链霉素、卡那霉素和制霉菌素等。9日龄～11 日龄 SPF鸡胚、1 日龄SPF雏鸡。pH 7.0~～7.4,0.01 mol/L等渗磷酸盐缓冲液(PBS):配制方法见附录 B。0.2 mol/L磷酸氢二钠:配制方法见附录 B。阿氏液：红细胞保存液，配制方法见附录B。 1%鸡红细胞(RBCs):配制方法见附录 B。拭子：脱脂棉球直径约0.4cm，1.034×105Pa高压蒸汽灭菌15min。新城疫病毒标准阳性血清和标准阴性血清：由指定单位提供。4.1.2样品采集和制备活禽采集咽喉拭子和泄殖腔拭子（需带有可见粪便）雏禽采集新鲜粪便