WS_T 497-2017侵袭性真菌病临床实验室诊断操作指南.pdf

ICS 11.020C 50wS中华人民共和国卫生行业标准WS/T 497—2017侵袭性真菌病临床实验室诊断操作指南Performance guideline for clinical laboratory diagnosis of invasive fungal diseases2017-01-15 发布2017-07-01实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会发布 WS/T 497-2017次目前言.1范围2术语和定义3标本采集及处理4标本形态检查5真菌培养.6培养诊断.+.7非培养诊断8药物敏感试验参考文献 WS/T497—2017言前本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准起草单位：中国医学科学院北京协和医院、北京大学第一医院、复旦大学附属华山医院。本标准起草人：徐英春、李若瑜、章强强、王瑶、王贺、余进、郭莉娜、张丽、范欣。I WS/T497—2017侵袭性真菌病临床实验室诊断操作指南1范围本标准规定了侵袭性真菌病临床实验室诊断操作指南，包括标本采集处理、形态检查、真菌培养、培养诊断、非培养诊断和药物敏感试验。本标准适用于具有Ⅱ级生物安全防护能力的临床实验室。2术语和定义下列术语和定义适用于本文件。2.1侵袭性真菌病invasivefungaldisease;IFD真菌侵人人体组织、血液，并在其中生长繁殖所致组织损害、器管功能障碍、炎症反应的病理改变及病理生理过程。根据患者宿主因素、临床特征和微生物学检查、将IFD诊断分为确诊、拟诊和疑似。2.2最小抑菌浓度minimum inhibitoryconcentration；MIC按照标准操作规程进行体外真菌稀释法或连续浓度梯度稀释法药物敏感试验时，在特定培养时间及温度的条件下，能导致特定程度肉眼可见真菌生长抑制的最低药物浓度。2.3剂量依赖敏感susceptibledosedependent;SDDMIC为剂量依赖敏感时，给予高于常规给药剂量且达到最大血药浓度时，临床治疗有效。2.4最低有效浓度minimum effective concentration;MEC曲霉在含系列浓度的棘白菌素类药物的培养基中培养时，与生长对照孔中的菌丝形态相比，菌丝变短、变圆、变粗的最低药物浓度。2.5折点breakpoint临床上将抗菌药物对真菌分为敏感、耐药、中介或剂量依赖敏感的特定MIC值。折点系综合体外的MIC值、耐药机制、抗菌药物PK/PD参数及临床疗效而得出，还可能随环境改变而改变（如感染部位、常规给药剂量的改变、给药途径及频次的改变）。2.6消化液lysis solution用于呼吸道标本等的前处理的化学试剂，起粘液溶解作用，常用N-乙酰-L-半胱氮酸、5%草酸或二巯基苏糖醇等。3标本采集及处理3.1血液标本采集和处理3.1.1采集部位消毒一步法：葡萄糖酸氯己啶作用30s，或70%异丙醇消毒后自然干燥。1 WS/T497—20三步法：a）70%乙醇擦拭静脉穿刺部位，作用30s以上、待十；b）1%～2%碘酊从穿刺点向外画圈消毒至消毒区域直径3cm，作用30s或10%碘伏作用60 s;c）70%乙醇脱碘：对碘过敏者，用70%乙醇消毒60s，待乙醇挥发干燥、采集标本。3.1.2标本采集宜在抗真菌药物使用前，发热初期或寒颤期采静脉血。采集后立即注入血培养瓶内并轻轻摇匀。至少采集2套。标本与培养基比例为1/10～1/5（成人每瓶8mL～10mL），应包括需氧瓶或真菌瓶。3.1.3标本处理2h内常温送检。若不能及时送检，则常温保存。评估导管相关性血流感染（CRBSI)时，如患者已拔管，应采集2套外周血进行培养，同时做导管尖Maki法半定量培养（导管尖长5cm），如1套及以上外周血培养阳性，导管尖培养阳性(≥15CFU)，且血培养与导管尖培养菌种相同，即为CRBSI。如患者尚未拔管，应至少采集1套外周血培养，同时尽快采集等量的导管血进行培养，如导管血与外周血培养均阳性，导管血阳性时间比外周血早2h，或导管血中菌量为外周血中菌量5倍以上，且没有其他明确感染源，即为CRBSI；如导管血培养阴性，外周血培养阳性且为念珠菌属，且没有其他明确感染源，也可能为 CRBSI.3.2骨髓标本采集和处理3.2.1标本采集使用肝素化的注射器或溶解离心管采集骨髓液0.5mL（儿童）至3mL（成人）后送检。3.2.2标本处理15min内常温送检。若不能及时送检，则常温保存。不宜常规做骨髓液培养，如需培养可将骨髓液接种于培养瓶，但易出现假阳性。骨髓液需同时做吉姆萨染色镜检。3.3静脉导管标本采集和处理3.3.1标本采集剪取导管尖段5cm置于无菌容器中送检。3.3.2标本处理15min内常温送检。若不能及时送检，则4℃C保存。将导管置于血平板上，使用无菌镊子将其从平板一端滚动至另一端，滚动4次，做