SN_T 3435-2012油棕枯萎病菌检疫鉴定方法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3435—2012油棕枯萎病菌检疫鉴定方法Detection and identification of Fusarium oxysporumSchlecht. f. sp. elaeidis Toovey2013-07-01实施2012-12-12 发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 中华人民共和国出人境检验检疫行业标准油棕枯萎病菌检疫鉴定方法SN/T 3435-2012*中国标准出版社出版北京市朝阳区和平里西街甲2号（100013）北京市西城区三里河北街16号（100015）总编室：（010址 www.spc. net. cn中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*开本 880×1230 1/16印张 0.75字数 22千字2013年6月第一版2013年6月第一次印刷印数 1—1 600*书号：155066·2-25285 SN/T 3435—2012前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准负责起草单位：中华人民共和国海南出人境检验检疫局。本标准参加起草单位：中华人民共和国珠海出人境检验检疫局、中华人民共和国山东出人境检验检疫局。本标准主要起草人：韩玉春、刘福秀、徐卫、李伟东、林明光、张建军、吴兴海。I SN/T 3435--2012油棕枯萎病菌检疫鉴定方法1范围本标准规定了油棕枯萎病菌（Fusarium orysporum Schlecht.f.sp.elaeidis Toovey）的检疫鉴定方法。本标准适用于植物检疫中油棕上枯萎病菌的检疫鉴定、2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。SN/T2122进出境植物及植物产品检疫抽样3原理学名: Fusarium orysporum Schlecht. f. sp. elaeidis Toovey中文名：油棕尖镰孢专化种英文名:vascular oil palm wilt油棕枯萎病菌属于真菌界 Fun孢纲Hyphomycetes,瘤座孢目 Tu-半知菌类FpngiImperfecti1 berculariales,瘤座孢科 Tuberculafiaceae，镰孢菌属 Fusarium 真菌。油棕枯萎病菌可侵染油棕的粮部并直接在真维管束内生长。该病菌可导致被侵染油棕叶片产生急病害的症状;病原菌的形态、病原菌的培养性状性或慢性枯萎症状,其典型的内部症状是维管束变褐。以及致病性测定是鉴定油棕枯萎病菌的主依事红4试剂与培养基4.1试剂0.1%升汞、0.5%次氯酸钠、吐温-20、链霉素、琼脂粉、马铃薯、葡萄糖。4.2培养基病菌分离和纯化采用PDA和SNA培养基。5仪器和用具5.1仪器生物显微镜、生物培养箱、高压灭菌锅、天平、超净工作台等。5.2用具酒精灯、培养皿、试管、载玻片、盖玻片、三角瓶、量筒、血球计数板、注射器、接种针、接种环、移液器、1 SN/T 3435--2012手术刀、手术剪、镊子、玻璃棒等。6鉴定方法6.1 王现场检疫6.1.1　样品抽取按照SN/T 2122的方法进行抽样。6.1.2症状观察现场检疫时，应仔细观察油棕根部、枝干、树冠、叶片等部位是否有典型症状或可疑症状，症状描述参见附录 A,症状图片参见附录B。如发现可疑植株或植株所带的土壤，带回实验室做进一步鉴定。6.2室内检测与鉴定6.2.1植物组织中病菌的分离剪取可疑的植物组织，清水冲洗后，用0.1%的升汞消毒5min，灭菌水洗3次，将再其移到PDA的培养基中，置25℃土1℃恒温光照培养箱12h光照与黑暗交替培养。当发现可疑的菌落，及时将菌落移植另一新的PDA平板上，进一步纯化培养。记录4d和7d的菌落直径大小，颜色变化；显微镜下观察大、小型分生孢子和厚垣孢子的大小、形状和着生方式；产孢细胞大小和形态特点等情况。分离出来的病原物产孢后，采用单孢分离法进一步纯化。将分生孢子制成浓度为10CFU/ml的孢子悬浮液。在超净工作台上用接种环将孢子悬浮液涂在PDA平板表面，用低倍镜（10×）从培养IⅢ反面检查，如发现视野内只有一个孢子，同时附近也没有孢子存在，就用记号笔在培养血底部（孢子存在位置）画-一个小圆圈作记号，将带有小块单孢子的PDA培养基切下，移植到新的PDA培养基平板中。用封口膜封好PDA平板，25℃士1℃恒温培养。分离纯化的病原菌转到PDA斜面上4℃保存。同时尽快将分离得到的培养物转移至营养贫乏的培养基SNA上进行培养，并用冷冻干燥或液氮超低温冻结法保藏，以保持菌株的野