SN_T 2601-2010植物病原细菌常规检测规范.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T. 2601—2010植物病原细菌常规检测规范Criterion for detection of phytopathogenic bacteria2010-05-27发布2010-12-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局数版 SN/T 2601—2010前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国山东出人境检验检疫局。本标准主要起草人：厉艳、封立平、吴兴海、甘琴华、邵秀玲、魏晓棠、宋涛。 SN/T 2601--2010植物病原细菌常规检测规范1范围本标准规定了植物病原细菌常规检测的常用试剂、培养基、器械设备、检测方法、鉴定流程、结果判定以及菌种保存等方面的要求和规范。本标准适用于进出境植物及其产品上病原细菌的常规检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件，凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。SN/T2122进出境植物及植物产品检疫抽样3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3. 1植物病原细菌phytopathogenicbacteria细菌是属于原核生物界（Procaryotae)的单细胞生物，有细胞壁，没有细胞核。植物病原细菌是细菌中对植物具有致病性的特殊类群。3.2症状symptom植物受病原物或不良环境因素的侵扰后，内部的生理活动、外观或生长发育所显示的某种异常状态。3.3喷菌现象bacteria exudation,BE由细菌侵染所致植物病害的病部，可以在徒手切片中观察到有大量细菌从病部喷出，这种现象称为喷菌现象。3. 4选择性培养基selective medium能够保证特定的微生物在其中生长、繁殖，而部分或全部抑制其他微生物生长的培养基。3.5非选择性培养基non-selectivemedium对微生物的生长、繁殖没有选择性抑制的培养基。3.6致病性测定pathogenicity test对病原物具有的侵染寄主植物并引起病害能力的测定。3.7过敏性反应hypersensitiveresponse，HR植物与病原菌非亲和互作导致植物被侵染部位的细胞迅速坏死即过敏性反应。 SN/T2601—20104常用试剂和培养基4.1常用试剂除非另有说明，在检测中仅使用确认为分析纯的试剂、蒸馏水或去离子水。4.1.1革兰氏染色液。4. 1.2鞭毛染色剂。4.1.3明胶：用于明胶液化试验。4.1.4乙酸铅（或三氯化铁）：用于硫化氢试验。4.1.5过氧化氢：用于过氧化氢酶试验。4.1.6格里斯氏(Griess)试剂：用书硝酸盐还原试验。4,1.7葡萄糖：用于葡萄糖利用试验。4.1.83吲哚试剂：用于吲哚试验。4.1.9盐酸二甲基对苯撑二胺（或四甲基对苯撑胺）：用于氧化酶试验4.1.10微或常量糖发酵试剂管（葡萄糖蔗糖、阿拉伯（七叶苷、水杨苷）。细菌生化试剂管可代替相应的生化读验培养基和试剂。4.2培养基除非另有说明，在检测中所使用的培养基一般采用121℃湿热灭菌15min（分离植物病原细菌常用的培养基成分见附录A）。5常用器械设备5.1常用仪器超净工作台、生物显微镜、体靓显微镜、电子天平、照恒温培养箱高压灭菌器、离心机、生化培养箱、烘箱、恒温水浴锅。5.2常用实验用具剪刀、解剖刀、接种针（环）、镊子培养皿、酒精划、、三角烧瓶、盘篱、移液器。6现场检疫按照SN/T2122的规定进行检疫抽样。7病原细菌常规检测方法7.1初步诊断7.1.1症状检查根据特定病害在不同品种、不同时期、不同环境条件下的症状变化特点而进行典型症状观察。如果待检样品为苗木等繁殖材料，首先肉眼观察待检植株的外部形态，根据细菌的致病特点，观察植株是否有叶斑、枝枯、软腐、环腐、萎、溃疡、疮痴、组织增生等症状，对有明显植物病原细菌危害症状2 SN/T2601—2010的部分进行显微镜检查。如果待检样品为种子，根据特定病害在种子上的症状特点，检查种子表面是否有斑点、变色等危害症状。必要时将种子播种在湿润吸水纸上，观察幼芽和幼苗是否有危害症状，作出初步诊断。如上述观察未发现典型症状仍需进行病菌的分离与培养。7.1.2显微镜检查在病健交界处切取小块病组织，平放在载玻片上的水滴中，加盖玻片在低倍镜下检查，观察有无喷菌现象。7.2病菌的分离与培养7.2.1培养基针对待检样品及其症状特点，一般选用适宜的非选择性培养基进行病原细菌的分离。从介质土、种子或腐烂组织中分离病原菌，通常使用选择性培养基。7.2.2分离方法和菌落的选择种子样品的病菌分离，可选取适童种子，经表面消毒、浸泡、破碎、离心、过滤等程序，在培养基上适温培养。分离的具体方法和条