NY_T 2116-2012虫草制品中虫草素和腺苷的测定 高效液相色谱法.pdf

ICS 67.050X 04NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 2116--2012虫草制品中虫草素和腺苷的测定高效液相色谱法Determination of cordycepin and adenosine in cordyceps productsby high performance liquid chromatography method2012-02-21 发布2012-05-01实施中华人民共和国农业部发布 NY/T 2116—2012前言本标准按照GB/T 1.1一2009给出的规则起草。本标准由中华人民共和国农业部种植业司提出并归口。本标准起草单位：农业部食用菌产品质量监督检验测试中心（上海）、上海市农业科学院农产品质量标准与检测技术研究所。本标准主要起草人：邢增涛、饶钦雄、黄志英、赵晓燕、白冰、邵毅。I NY/T 2116--2012虫草制品中虫草素和腺苷的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了虫草原料、虫草产品中虫草素和腺苷高效液相色谱的测定方法。本标准适用于虫草原料、虫草产品中虫草素和腺苷的测定本标准中虫草素和腺苷的定量测定范围均为 30mg/kg～1000 mg/kg。本标准中虫草素和腺苷的检测限均为 10 mg/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理试样中虫草素和腺苷经水超声提取后，用高效液相色谱进行测定，外标法定量。4 试剂除非另有规定，仅使用分析纯试剂和符合GB/T6682中规定的一级水。4.1 乙腈(C²H:N),色谱纯。4.2虫草素和腺苷标准物质(色谱级,纯度≥95%）。4.3虫草素和腺苷标准溶液，准确称取虫草素（4.2)和腺苷（4.2)标准品各10mg(按实际含量折算），用流动相溶解定容至100 mL,摇匀。该混合标准储备液中虫草素和腺苷的质量浓度均为100μg/mL，4℃冰箱保存,有效期1个月。5仪器和设备5.1高效液相色谱仪，配有紫外检测器或者二极管阵列检测器。5.2超声波清洗器，功率大于450W，频率50Hz～100Hz。5.3分析天平,感量0.0001g。5.4微孔滤膜,0.45 um,水相。5.5 离心机。5.6实验室样品粉碎机。6测定步骤6.1试样制备固体试样：称取粉碎均匀的样品0.5g(精确至0.0001g)于100mL容量瓶中，加水约80mL，置于超声波仪中超声提取3h,取出后用水定容，摇匀。取1mL样液离心后，将上清液过0.45μm微孔滤膜（5.4），滤液供高效液相色谱法分析。1 NY/T 2116—2012液体试样：准确吸取5g样品于50mL容量瓶中，加水约40mL，置于超声波仪中超声提取30min，取出用水定容摇匀。取样液过0.45μm微孔滤膜(5.4），滤液供高效液相色谱法测定。6.2液相色谱测定6.2.1液相色谱条件色谱柱:Ci柱,250 mmX4.6 mm(i.d.）,5 um,或相当规格色谱柱。流动相：乙腈十水=5十95，用前过0.45um滤膜，脱气。流速:1.0 mL/min。柱温：35℃。波长:260 nm。进样量：10 μL。6.2.2标准曲线的绘制准确吸取 0.1mL、0.2mL、0.5mL、1.0 mL、2.0mL 和 5.0 mL混合标准溶液（4.3)于10 mL容量瓶中,用水定容、摇匀，该标准曲线浓度为 1.00 μg/mL、2.00 μg/ mL、5.00 μg/ mL、10.0 μg/ mL、20.0ug/mL和50.0 μg/mL，按参考色谱条件测定，以虫草素和腺苷质量浓度为横坐标,相应的峰面积为纵坐标，计算标准曲线，求线性回归方程。标准品色谱图参见附录 A。6.2.3测定按照保留时间进行定性，样品与标准品保留时间的相对偏差不大于2%，多点校正外标法定量。待测样液中虫草素和腺苷的响应值应在标准曲线范围内，超过线性范围则应稀释后再进样分析。6.2.4结果计算试料中虫草素或腺苷的量以质量分数计，单位以毫克每千克(mg/kg)表示，按式(1)计算。AXps XV(1)=JAsXm式中：A试样中虫草素或腺苷的峰面积；As--标准工作液中虫草素或腺苷的峰面积；-标准工作液中虫草素或腺苷的质量浓度，单位为微克每毫升（μg/mL)；psV试样液最终定容体积，单位为毫升（mL）；-m-试料的质量，单位为克（g）；f样品稀释倍数。计算结果保留三位有效数字。7精密度7.1重复性在重复性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过算术平均值的5%。7.2再现性在再现性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过算术平均值的5%。2 NY/T 2116—2012附录A(资料