SN 0294-1993《出口贝类腹泻性贝毒素检验方法》.pdf

SN中华人民共和国进出口商品检验行业标准SN 0 2 9 4 - 93出口贝类腹泻性贝类毒素检验方法Method for the determination of diarrheticshellfish poison in shellfish for export1993-12-28发布1994-05-01实施中华人民共和国国家进出口商品检验局发布 中华人民共和国进出口商品检验行业标准出口贝类腹泻性贝类毒素检验方法SN .0294—93Method for the determination of diarrheticshelfish poison in shellfish for export1主题内容与适用范围本标准规定了海产双壳类贝肉、贝柱、外套膜及其制品的腹泻性贝类毒素检验方法。本标准适用于海产双壳类贝肉、贝柱、外套膜及其制品的腹泻性贝类毒素的检验。2 引用标准GB4789.26.罐头食品商业无菌的检验ZBB50001出口水产品检验抽样方法ZBB50004出口冷冻水产品解冻方法3检验批同一检验批的商品应具有相同特征，如产地、规格等。4样品的保存4.1．样品要有充分的代表性并尽可能没有个体差异。同时，还要有充分的个数。去壳贝肉、带壳的或罐装的等，均应采取足够的个数并使贝肉达200g以上。4.2远离实验室，不能及时送检的样品，除了在常温下品质不会发生变化的，应将样品置于合成树脂袋内冷冻送检。如为带壳样品，应按5.3的方法开壳，去除水分后冷冻送检。5样品的制备5.1生鲜带壳样品，用刀切开闭壳肌开壳取出贝肉。不得以加热及加药物的方法开壳。注意不要破坏闭壳肌以外的组织，尤其是中肠腺（又称消化盲囊，组织呈暗绿色或褐绿色）。将去壳贝肉放在孔径约2mm的金属网上，控水5min，按5.4或5.5制备检样。5.2冷冻的带壳样品，使其在室温下呈半冷冻状态后，以前述方法开壳取肉，这时的贝肉仍呈冷冻状态。经除去贝肉外部附着的冰片，轻轻抹去水分后，按5.4或5.5制备样品。5.3事先已去除水分的冷冻去壳贝肉，按5.4或5.5制备样品。5.4扇贝、贻贝、牡蛎等可以切取中肠腺的去壳贝肉，称量200g贝肉重量后仔细切取全部中肠腺，将中肠腺称重后细切混合做为检样。同时，注意不要使中肠腺内容物污染案板。5.5对不便切取中肠腺的去壳贝肉样品，可将全部贝肉细切、混合，做为检样。5.6为避免毒素的危害，应戴手套进行检验操作。移液管等用过的器材应在5%的次氯酸钠溶液中浸泡1h以上，以使毒素分解，同样，废弃的提取液等也应以上述溶液处理。1994-05-01实施中华人民共和国国家进出口商品检验局1993-12-28批准1 SN 0294-936测定方法6.1方法提要用丙酮提取贝类中毒素，再转移至乙醚中，经减压浓缩至干后，再以1%吐温60生理盐水溶解残留物注射小白鼠观察存活情况，计算其毒力。6.2试剂和材料6.2.1丙酮(分析纯)。6.2.2乙醚（分析纯）。6.2.31%吐温60生理盐水。6.3仪器和设备6.3.1旋转蒸发器。6.3.2均质器。6.3.3天平：感量0.1g。6.3.4刻度试管：15mL，具0.2mL刻度。6.3.5 冰箱:0~5℃和-15~20℃。6.3.6注射器：1mL。6.3.7注射器针头：8#。6.3.8体重为16～20g的健康ICR系雄性小白鼠。6.4测定步骤6.4.1提取6.4.1.1将检样置于均质杯内，加3倍量丙酮至少均质2min。如为小均质杯，可分两次操作。6.4.1.2用布氏漏斗抽滤并收集提取液。6.4.1.3对残渣以检样两倍量丙酮再抽滤两次，合并抽滤液。6.4.1.4将抽提液移入旋转蒸发瓶内，减压浓缩去除丙酮直至在液体表面分离出油状物。6.4.1.5将浓缩物移入分液漏斗内，以100～200mL乙醚和少量的水洗下粘壁部分，以不生成乳浊液的程度轻轻振荡，静置分层后去除水层。6.4.1.6用相当乙醚半量的蒸馏水洗醚层两次，再将醚层移入300～500mL的茄形瓶中，减压浓缩去除乙醚。6.4.1.7以少量乙醚将浓缩物移入50或100mL茄形瓶中，再次减压浓缩去除乙醚。6.4.1.8以1%吐温60生理盐水将全部浓缩物在刻度试管中稀释到10mL。按5.4条以中肠腺做为检样的，此时1mL液量相当于预先测定的20g去壳贝肉的重量。对其他检样，此时1mL液量也相当于20g去壳贝肉的重量，以此悬浮液做为试验溶液。6.4.1.9如必要时，对试验溶液可做进一步稀释，稀释前，应先以振荡器使试液成均一悬浮液，再取其部分以1%吐温60生理盐水稀释成4倍或16倍的试液。6.4.2小白鼠试验6.4.2.1以振荡器使试液或其稀释液成为均一的悬浮液。.6.4.2.2分别将1mL试液注射到三只体重16~20g的健康ICR系雄性小白鼠腹腔中。6.4.2.3按上项方法，注射1%吐