NY_T 2292-2012亚洲梨火疫病监测技术规范.pdf

ICS65.020.01B 15NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 2292—2012亚洲梨火疫病监测技术规范Guidelines for quarantine surveillance ofErwinia pyrifoliae Kim et al.2012-12-24发布2013-03-01实施中华人民共和国农业部发布 NY/T2292—2012前·言本标准按照GB/T1.1给出的规则起草。本标准由农业部种植业管理司提出。本标准由全国植物检疫标准化技术委员会（SAC/TC271)归口。本标准起草单位：全国农业技术推广服务中心、浙江省植物保护检疫局、浙江大学。本标准主要起草人：冯晓东、许志刚、林云彪、李红叶、胡白石、楼兵干、王荣洲。 NY/T2292—2012亚洲梨火疫病监测技术规范1范围本标准规定了农业植物检疫中亚洲梨火疫病的监测区域、监测时期、监测方法等。本标准适用于全国范围内亚洲梨火疫病的监测。2原理2.1分类地位亚洲梨火疫病菌ErwiniapyrifoliaeKimetal.属于肠杆菌科Enterobacteriaceae，欧文氏菌属Erwinia。病原菌呈短杆状，周生鞭毛，兼性好氧，不形成芽孢，不合成氧化酶，不还原硝酸盐。28℃在YPDA培养基上生长24h～48h后，可形成2mm的圆形白色菌落，菌落凸起不透明。该病菌主要为害亚洲梨（Pyruspyrifolia），由其危害引起的亚洲梨火疫病为亚洲梨树上的重要检疫性病害2.2监测原理亚洲梨火疫病的田间症状、生理生化反应、致病性测试和PCR反应特征等是监测、检测与鉴定的重要依据。3仪器设备显微镜、培养箱、摇床、高压灭菌器、微量移液器、PCR仪、凝胶成像仪、离心机、电泳槽和电泳仪等。4药品和培养基4.1药品牛肉浸膏，蛋白陈，酵母提取物，蔗糖和琼脂等。所有试剂均为分析纯，4.2培养基4.2.1NA培养基牛肉浸膏3g，蛋白陈5g，酵母提取物1g，蔗糖10g，琼脂15g，蒸馏水定容至1000mL，pH调至7.0~7.2,121℃灭菌20min。4.2.2YPDA培养基酵母提取物5g，蛋白陈10g，葡萄糖10g、琼脂粉20g，蒸馏水定容至1000mL，121℃灭菌20min。5疫情监测5.1监测植物梨、苹果、棠梨、山楂等蔷薇科植物，主要监测亚洲梨5.2监测区域重点监测疫情发生高风险区域，如亚洲梨集中种植区，境外引种繁育基地、集散地及周围其他寄主作物种植区。5.3监测时期梨树开花期开始到果实膨大中期结束。5.4监测方法5.4.1访问调查1 NY/T2292—2012向当地植保员、农技员、果农等相关人员询问调查当地梨、苹果、黑莓等亚洲梨火疫病寄主植物种植和病虫害发生情况，特别是苗木来源果园有无亚洲梨火疫病疑似症状（参见附录A)及其发生地点、发生时间、危害情况等信息，分析是否存在可疑发生区。5.4.2踏查对访问调查过程中发现的可疑发生区和其他有代表性的梨、苹果、黑莓等种植田块进行踏查，观察田间有无亚洲梨火疫病发病症状（参见附录A），必要时可采用系统监测定点调查。踏查发现可疑病害症状立即进行标记，对疑似病株先照相后取样，样品送相关实验室进行诊断鉴定。5.4.3定点监测一次。采用5点取样法，每个点随机选择有代表性的田块进行定点调查，在监测时期每15d调查一调查10株，统计病株率。同时随机选5株疑似发病植株（不足5株则全选），每株分东南西北4个方位各调查2个嫩梢，共调查8个嫩梢，计算病梢率，并做好记卖BANDARD6疫情鉴定6.1田间鉴定7与真菌性枯枝、小蠹虫梁火疫病的典型症主要检查嫩机、花病虫害行区分症状洲梨火疫病。如发现A蛀心危害、蝉害档不空鉴法进行疑似症状，可采用实S6.2实验室鉴定样品是镜检看有无喷菌现象现象厅立作进一步的从现场采回求进行实验验或P电泳结果：阳R检测鉴bp处有条带分离培养、接FT无梨火疫病。带出现的出现，且阴性现的前提待测对26.3鉴定报告验鉴定将实验室检017监测报告附录D植蓝测结果进行整监测结果理汇总形成监测8样品与菌株的保存人月.保保存不少于6样品应保存2个发现亚测疫病的样满后，需经灭菌处理。病菌的菌株可采佰荐分离并鉴定为亚洲梨火2 NY/T2292—2012附录A（资料性附录）亚洲梨火疫病典型症状与易混病虫害症状A.1亚洲梨火疫病典型症状A.1.1花簇枯死病菌最先侵染花器产生水渍状斑，花器不久萎熹变黑枯死。病菌沿发病花器的花梗向下扩展至果枝，再扩展至花簇中的其他花朵或幼果，以及叶柄和叶脉，直至整张叶片，最后整个花簇枯死发黑。在潮湿条件下，花梗、果柄和叶柄等组织上有菌脓渗出（见图A.1）。图A.1亚洲梨火疫病为害花簇(图片引自http：//.au/pbt/index.php?q=node/20pbtID=114)A.1.2枯梢和枯枝病菌侵染当年生新梢，以春梢为