SN_T 1129-2015牛病毒性腹泻/粘膜病检疫技术规范.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1129—20 15代替SN/T1129——2007,SN/T1905-2007牛病毒性腹泻/黏膜病检疫技术规范Quarantine protocol for bovine viral diarrhea/mucosal disease2015-09-02发布2016-04-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局O0副涂层查真伪 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准牛病毒性腹泻/黏膜病检疫技术规范SN/T1129---2015*中国标准出版社出版北京市朝阳区和平里西街甲2号（100029）北京市西城区三里河北街16号（100045）总编室：（010址中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*开本880×12301/16印张1字数26千字2016年3月第一次印刷2016年3月第一版印数1--1100*书号：155066·2-29873定价18.00元 SN/T 1129—2015前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准代替SN/T1129-2007《牛病毒性腹泻/粘膜病检疫规范》和SN/T1905-—2007《牛病毒性腹泻/粘膜病反转录聚合酶链反应操作规程》。本标准与所代替标准的主要技术差异如下：——整合了SN/T1129—2007和SN/T1905--2007内容；-按OIE《陆生动物诊断试验和疫苗手册》（2008版）修改了试验方法。本标准修改采用了世界动物卫生组织（OIE）《陆生动物诊断试验和疫苗手册》（ManualofDiagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals)(2008 版)中 2.4.8。本标准与OIE《陆生动物诊断试验和疫苗手册》2.4.8相比，主要技术异同如下：本标准采用了OIE规定的病毒分离与鉴定、荧光抗体试验、免疫过氧化物酶单层细胞试验、微量血清中和试验及酶联免疫吸附试验方法；一本标准增加了OIE中提及但没有详细操作规程的反转录聚合酶链式反应具体试验方法。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国福建出人境检验检疫局、中华人民共和国吉林出人境检验检疫局、中华人民共和国四川出人境检验检疫局。本标准主要起草人：白泉阳、孙颖杰、王伟利、王武军、孟庆峰、张体银、石建平、孟日增、张伯强、刘金华。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：-SN/T1129.1-2002;--—SN/T1129.2---2002;-SN/T1129--2007;—SN/T1905--2007。I SN/T 1129—2015牛病毒性腹泻/黏膜病检疫技术规范1范围本标准规定了牛病毒性腹泻/黏膜病的临床诊断、病毒分离鉴定、荧光抗体试验、免疫过氧化物酶单层细胞试验、微量血清中和试验、抗原捕获酶联免疫吸附试验、反转录-聚合酶链反应操作规程。本标准适用于进出口动物及其产品中牛病毒性腹泻/黏膜病的检疫。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T19495.2转基因产品检测实验室技术要求3符号和缩略语BVD:牛病毒性腹泻/黏膜病BVDV:牛病毒性腹泻/黏膜病病毒PBS:磷酸缓冲盐溶液MEM：最低基础培养基MDBK：牛肾传代细胞DEPC：焦碳酸乙二酯TCID50：半数组织培养感染量RNA:核糖核酸Taq酶：TaqDNA聚合酶RT-PCR：反转录-聚合酶链式反应4临床诊断4.1临床症状BVD潜伏期为7d～14d。急性病牛主要表现为突然发病，体温升高，重度腹泻，白细胞减少，大量流涎，口腔黏膜糜烂和溃疡，可在发病后几天死亡。慢性病例临床症状不明显或逐渐发病，生长发育受阻，消瘦，体重逐渐下降，比较特殊的症状是鼻镜上的糜烂，糜烂可在鼻镜上连成一片，表现为间歇性腹泻，病程较长，可在发病数周或数月后死亡。4.2病理变化消化道黏膜充血、出血、水肿和糜烂。特征性病变是食道黏膜糜烂，呈大小和形态不一的直线排列。瘤胃黏膜出血、糜烂，第四胃炎性水肿、糜烂。小肠呈急性卡他性炎症，肠壁水肿增厚，大肠呈卡他性、出1 SN/T1129-2015血性、溃疡性以至坏死性炎症。在流产胎儿的口腔、食道、真胃及气管内可见出血斑和溃疡。5病毒分离与鉴定5.13主要仪器设备5.1.1倒置显微镜。5.1.2恒温培养箱。5.1.3单道可调移液器。5.2试剂和材料5.2.1本标准所用试剂均为分析纯，试验用水应符合GB/T6682要求。5.2.2212.5cm²细胞培养瓶。5.2.3无BVDV抗体胎牛血清。5.2.4培养液：MEM营养液、生长液、维持