SN_T 3427-2012山茶花腐病菌检疫鉴定方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3427---2012山茶花腐病菌检疫鉴定方法Detection and identification of Ciborinia camelliae Kohn2013-07-01实施2012-12-12发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局中 SN/T 3427--2012前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国宁波出人境检验检疫局、中华人民共和国上海出入境检验检疫局中华人民共和国山东出人境检验检疫局。本标准主要起草人：张建成、张慧丽、郑炜、杨翠云、厉艳、封立平、陈先锋。- SN/T 3427—2012山茶花腐病菌检疫鉴定方法1范围本标准规定了山茶花腐病菌的检疫和鉴定方法本标准适用于山茶（Camellia spp.）上山茶花腐病菌（CiboriniacamelliaeKohn）的检疫鉴定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。SN/T1157进出境植物苗木检疫规程3原理3.1分类地位学名:Ciborinia camelliae L. M. Kohn 1979异名:Sclerotinia camelliae Hara igi9英文名：Camelliaflowerblight中文名：山茶花腐病菌。异名：山茶菌核病菌。山茶花腐病菌属真菌界（Fungi），子菌门（Ascomycota），子囊菌纲（Ascomycetes），柔膜菌目eae），叶杯菌属（Ciborinia）。山茶花腐病菌通常只侵染山茶属（Helotiales），核盘菌科（Sclerotir（Camelliaspp.）植物的花。地理分布和寄主参见附录A。3.2检疫鉴定依据以山茶花腐病菌在寄主植物上的症状特征以及菌核、产抱瓶梗和小型分生孢子的形态特征为鉴定依据。仪器设备4冰箱、解剖镜（最低10×）、生物显微镜（40×～800×）、恒温光照培养箱、高压蒸汽灭菌锅、接种针、镊子、酒精灯、玻璃盒或塑料盒、纸巾或滤纸、喷雾器、培养皿（直径90mm～100mm）、手术剪、手术刀、标签、载玻片、盖玻片等。5试剂和培养基70%（体积分数）乙醇、次氯酸钠、纯乳酸（可添加0.5%甲基蓝）、马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）。6抽样口岸查验进境山茶属植物时，按照SN/T1157对山茶属苗木进行抽样与取样。1 SN/T342720127检验方法7.1现场检验重点检查样品的花，观察样品的花是否有符合8.1疑似症状特征，采集那些变褐、变干或任何可疑症状的花，花尽可能的多（至少5朵）。进一步作实验室检验。标注品名、数量、生产国及取样地点、取样人和取样日期等样品信息。7.2实验室检验7.2.1寄主病原物观察观察花瓣上是否有病斑、菌核、分生孢子座，花基部是否形成白色环状菌丝体。7.2.2显微观察潮湿时，花瓣上可产生褐色至黑色有光泽的液滴。解剖镜下挑取黑色液滴，以乳酸（可添加0.5%甲基蓝）为载浮剂，生物显微镜下（40×～800×）观察产孢瓶梗和分生孢子座。7.2.3保湿培养选取无褐变或初侵染未腐烂的花和花瓣，根据样品的大小选择合适的培养皿或塑料盒，内置一层灭菌滤纸，滤纸上放置灭菌的毛巾或纸巾，加人无菌水，放人恒温恒湿光照培养箱中.22℃土3℃，12h光照培养，培养3d～4d后在解剖镜下观察，按照7.2.2中的描述挑取子实体，制片后在显微镜下观察。如果没有变化，继续保湿培养，并定期进行观察，培养3周仍无变化，则停止培养，植物材料经高压蒸汽灭菌处理。7.2.4分离培养取感病花瓣病健交界处组织数块，用1%NaOC1溶液表面消毒1min，无菌水冲洗3次，置于PDA平板上，于20℃～25℃、12h光照下培养。如无新感病组织可用，可用其他部位如花瓣基部的白色菌丝环或菌核代替花瓣分离。待菌落出现后观察菌落的形态、颜色、生长速率及子实体等培养性状，显微镜检分生孢子座、产孢细胞、分生孢子的形态特征，将疑似山茶花腐病菌的菌株转到新鲜PDA平板上纯化，保存备用。8鉴定特征8.1危害症状主要症状是花瓣变褐和花坏死。首先在花瓣的基部，出现棕色小斑点，斑点逐步扩展，最后向上蔓延至整个花瓣（大约每天1cm），边缘腐烂。严重时，花维管束变黑，完全坏死，干腐，脱落（参见图B.1a和图B.1b）。但花的结构保持良好，即使整个枯萎的花经手挤压后花瓣不会脱落。环境湿润时，花瓣基部或中心产生褐色至黑色有光泽的小“液滴”，直径1mm，在显微镜下，可以看到产生大量分生孢子梗和链状分生孢子的分生孢子座。在长期受侵染的植株上，分生孢子座汇集形成粘性黑斑（参见图B.1c)。分生孢子座的