SN_T 1961.12-2013出口食品过敏原成分检测 第12部分：实时荧光PCR方法检测芝麻成分.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1961. 12—2013第12部分：出口食品过敏原成分检测实时荧光PCR方法检测芝麻成分Detection of allergen components in food for export-Part 12 : Real time PCR method for detecting sesame components2013-09-16实施2013-03-01发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1961.12--2013前厂言SN/T1961《出口食品过敏原成分检测》共分为19部分：第1部分：酶联免疫法检测花生成分；第2部分：实时荧光PCR法检测花生成分；第3部分：酶联免疫吸附法检测荞麦蛋白成分；第4部分：实时荧光PCR方法检测腰果成分；第5部分：实时荧光PCR方法检测开心果成分；一一第6部分：实时荧光PCR方法检测胡桃成分；第7部分：实时荧光PCR方法检测胡萝卜成分；-第8部分：实时荧光PCR方法检测榛果成分；第9部分：实时荧光PCR方法检测杏仁成分；第10部分：实时荧光PCR方法检测虾/蟹成分；第11部分：实时荧光PCR方法检测麸质成分；-第12部分：实时荧光PCR方法检测芝麻成分；第13部分：实时荧光PCR方法检测小麦成分；一第14部分：实时荧光PCR方法检测鱼成分；第15部分：实时荧光PCR方法检测芹菜成分；第16部分：实时荧光PCR方法检测芥末成分；第17部分：实时荧光PCR方法检测羽扇豆成分；第18部分：实时荧光PCR方法检测荞麦成分；第19部分：实时荧光PCR方法检测大豆成分。本部分为SN/T1961的第12部分。本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局、深圳大学。本部分主要起草人：陈颖、蒋丹、曹际娟、麻丽丹、郑秋月、刘志刚、吉坤美、吴序栎。1 SN/T 1961.12-2013出口食品过敏原成分检测　第12部分：实时荧光PCR方法检测芝麻成分1范围SN/T1961的本部分规定了食品中过敏原芝麻成分的实时荧光PCR法检测方法。本部分适用于食品及其原料中过教原芝麻成芬的定性检测。本部分所规定方法的最低检出限LOD)为0.01%（质量分数）。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1过敏原　allergen又称致敏原或变应原，是指能够引起变态反应的抗原。3.2芝麻sesame别名：胡麻、白麻，属胡麻科（Pellaliaceae)胡麻属（SesamuLinn3.3实时荧光 PCR real time PCR在PCR反应体系中加人荧光基团，利用荧光信号的积累实时监控整个PCR扩增过程。3. 4Ct 值 cycle threshold每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数。4　方法提要样品经研磨后.提取 DNA，以 DNA为模板，采用芝麻管家基因 2S albumin mRNA 设计特异性检测引物和探针进行实时荧光PCR扩增，根据Ct值，判断样品中是否存在过敏原芝麻成分。5试剂和材料除另有规定外，试剂为分析纯或生化试剂。实验用水应符合GB/T 6682中一级水的规格。所有试1 SN/T 1961.12—2013剂均用无 DNA酶污染的容器分装。5.1芝麻成分扩增引物和探针、内参照（真核生物成分)引物和探针详见表1。表 1试验用引物和探针名称序列(5-3)目的基因TCTGCCCTATCAACTTTCGATGGTA内参照5端引物AATTTGCGCGCCTGCTGCCTTCCTT内参照3端引物真核生物18SrRNA基因FAM-CCGTTTCTCAGGCTCCCTCTCCGGAATCGAACC-TAM-内参照探针RA芝麻5端引物CCAGAGGGCTAGGGACCTTC芝麻管家基因芝麻3端引物CTCGGAATTGGCATTGCTG2S albumin mRNA芝麻探针FAM-TCGCAGGTGCAACATGCGACC-TAMRA5.2 CTAB缓冲液:55 mmol/L CTAB,1 400 mmol/L NaCl,20 mmol/I. EDTA,100 mmol/L Tris,用10%盐酸调pH至8.0,121℃,高压灭菌20min，备用。5.3TE 缓冲液（Tris-Cl、E