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ICS 67.080.20B 31NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 1651-2008蔬菜及制品中番茄红素的测定高效液相色谱法Determination of lycopene in vegetables and derived products---HPLC2008-07-14 发布2008-08-10实施中华人民共和国农业部发布
NY/T 1651--2008前言本标准的附录 A为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部种植业管理司提出并归口。本标准起草单位:农业部蔬菜品质监督检验测试中心(北京)、中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所。本标准主要起草人:刘肃、王敏、靳松、邵华。I
NY/T 1651—2008蔬菜及制品中番茄红素的测定高效液相色谱法1 范围本标准规定了用高效液相色谱仪测定蔬菜及制品中番茄红素的方法。本标准适用于番茄、胡萝卜、番茄汁、番茄酱等蔬菜及制品中番茄红素的测定。本方法的线性范围为 10 ng~1000 ng。本方法的检出限为 0.13mg/kg。2原理蔬菜及制品中的番茄红素经丙酮一石油醚混合溶液L(CsH.O十CH14)=1十1}提取后,用石油醚液萃取,再用二氯甲烷定容,最后用配有紫外检测器的高效液相色谱仪在波长472nm处测定,根据色谱峰的保留时间定性,外标法定量。3 试剂除非另有说明,在分析中至少使用色谱纯试剂和 GB/T 6682中规定的一级水。所有有机试剂每1000mL中加人1g2,6-二叔丁基对甲酚(3.1)3.12,6~二叔丁基对甲酚,分析纯。3.2 丙酮(CsH.O),分析纯。3.3 石油醚(C.H14),60℃~90℃,分析纯。3.4丙酮—石油醚混合溶液(CH.O+C.H14)=1十1]。3.5 甲醇(CH;OH)。3.6 乙腈(CH:CN)。3.7 二氯甲烷(CH,Cl2)。3.8甲醇-乙腈一二氯甲烷混合溶液L(CH:OH十CH;CN十CH²Cl²)=20十75十5]3.9无水硫酸钠(NazSO4),分析纯。3.10番茄红素标准品,纯度≥95%。3.11番茄红素标准贮备液:准确称取 0.00100g番茄红素标准品,用二氯甲烷(3.7)溶解,转移至 10mL容量瓶中,定容至刻度,得到质量浓度为100 mg/L的番茄红素标准贮备液。分装于三个样品瓶中,应避免光照和高温,贮于一20℃~一16℃冰柜中备用。3.12番茄红素标准工作溶液:使用时番茄红素标准贮备液(3.11)用二氯甲烷(3.7)稀释得到质量浓度为 20 mg/L和5mg/L的番茄红素标准工作溶液。4仪器4.1高效液相色谱仪,配紫外检测器。4.2分析天平,感量0.01 mg和0.01g。4.3 砂心漏斗,G4。1
NY/T 1651--20084.4分液漏斗,250 mL。4.5旋转蒸发仪。4.6氮吹仪。4.7组织捣碎机。5 试样制备蔬菜样品洗净后去蒂、去皮,若有籽去籽,按照四分法取样后放入食品加工机中挎碎成匀浆。将匀浆试样放人聚乙烯瓶中于一20℃~一16℃条件下保存。蔬菜制品密封好后置于一20℃~一16℃条件下保存。6分析步骤6.1 提取将试样充分混匀,蔬菜或汁类制品称取试样5g,酱类制品称取试样2g,精确至0.01g,置于153mL烧杯中,加人适量丙酮一石油醚混合溶液(3.4)直至完全淹没试样,用玻璃棒搅拌后置,使看红素充分溶解,然后移人砂心漏斗(4.3)中真空抽滤,滤液收集于试管中。重复上述步臻直至将试样洗至无色。6.2 净化6.2.1蔬菜和汁类制品将全部滤液转移至分液漏斗中,静置分层,上层有机相通过装有无水硫酸钠(3.9)的漏斗后收集至圆底烧瓶中,下层水相继续用20mL石油醚(3.3)萃取,继续收集有机相,无水硫钛用石油醚(3.3)洗至无色并收集滤液。全部有机相在水浴温度35℃的旋转蒸发仪上浓缩至近干,再经氢气欧于。若有残留水分可加人少量无水硫酸钠(3.9)吸附。用10.00mL二氯甲烷(3.7)溶解,如颜色较深,再用二氯甲烷(3.7)稀释5倍,过0.45μm微孔滤膜,待测。6.2.2酱类制品将全部滤液转移至圆底烧瓶中在水浴温度35℃的旋转蒸发仪上浓缩至近干,再经氢气欧干。若有残留水分可加入少量无水硫酸钠(3.9)吸附。用10.00mL二氯甲烷(3.7)溶解,如颜色较深,再用二氯甲烷(3.7)稀释5倍,过0.45μum微孔滤膜,待测。6.3色谱参考条件检测波长:472 nm。色谱柱:C8不锈钢柱,柱长250mm,内径 4.6 mm,粒径5 μm,或相当者。流动相:甲醇乙腈一二氯甲烷混合溶液L(CH:OH÷CH:CV→CH,C1.)=20-755~流速:1.0 mL/min。进样体积:10μL。6.4 测定分别将标准溶液和待测液注人高效液相色谱仪中,以保留时间定性,以待测液峰面积与标准溶液峰面积比较定量。6.5
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