SCT 7205.1-2007牡蛎包纳米虫病诊断规程 第1部分：组织印片的细胞学诊断法.pdf

ICS 65.020.30B 41Sc中华人民共和国水产行业标准SC/T 7205.1--2007牡蛎包纳米虫病诊断规程第1部分：组织印片的细胞学诊断法Diagnostic Protocols for Bonamiosis of Oyster-Part 1: Cytological Method with Tissue Imprints2007-09-14 发布2007-12-01实施中华人民共和国农业部发布 SC/T 7205.1—2007前言SC/T7205《牡蛎包纳米虫病诊断规程》分为三个部分第1部分：组织印片的细胞学诊断法；-第2部分组织病理学诊断法；一第3部分：透射电镜诊断法。本部分为SC/T7205的第1部分。本部分的附录A和附录B为规范性附录。本部分由中华人民共和国农业部渔业局提出。本部分由全国水产标准化技术委员会归口。本部分起草单位：中国水产科学研究院黄海水产研究所、全国水产技术推广总站、深圳出人境检验检疫局。本部分主要起草人：杨冰、黄健、陈爱平、江育林、王崇明、王秀华、魏琦、刘莉。? SC/T 7205.1--2007牡蛎包纳米虫病诊断规程第1部分：组织印片的细胞学诊断法1 范围SC/T7205的本部分规定了牡蛎包纳米虫病组织印片的细胞学诊断法的原理、试剂与材料、仪器设备、操作步骤和结果判定。本部分适用于现场或基层实验室对患病牡蛎及其他贝类个体进行包纳米虫病的普查和初步诊断。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的必威体育精装版版本。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本适用于本标准。SC/T7202.1一2007斑节对虾杆状病毒病诊断规程第1部分：压片显微镜检查法SC/T7202.3—2007斑节对虾杆状病毒病诊断规程第3部分：组织病理学诊断法SC/T7205.3—2007牡蛎包纳米虫病诊断规程第3部分：透射电镜诊断法3‘原理3.1牡蛎包纳米虫及其病理学特征包纳米虫病是由牡蛎包纳米虫（Bonamia ostreae）、致死包纳米虫（Bonamia ecitiosus）和鲁夫来小胞虫(Mikrocytos roughleyi)所引起的。包纳米虫主要寄生在宿主的血细胞细胞质内，也可在消化道的上皮细胞或间质细胞间游离存在，尤其在坏死的结缔组织中更易发现，有时在鳃和外套膜出现黄的色变和广泛的灰白色小溃疡病灶，但多数受感染的牡蛎外观正常。病灶先在鳃、外套膜和消化腺的结缔组织中出现，血细胞内的包纳米虫随着其数量剧增而很快扩散全身，出现浓密的血细胞浸润，最终导致牡蛎死亡。包纳米虫感染的病理学特征与受感染的宿主种类和数量有关。包纳米虫病在全年都可能发生，但其患病率和感染强度随季节变暖而增加。这两种包纳米虫的潜伏期长达五个月，用组织学的切片染色法或用细胞学的组织印迹法，在此期间可能检测不到感染。牡蛎属（Ostrea spp.）鹑螺属（Tiostrea spp.）和巨蛎属（Crassostrea spp.）的所有种可能都是易感宿主。3.2技术原理通过光镜观察经吉姆萨氏染液染色后的组织印片，鉴别包纳米虫的形态和数量，从而初步判断被检样品是否感染包纳米虫。4试剂和材料4.1除非另有说明,在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和蒸馏水或去离子水或相当纯度的水。4.2甲醇。4.3中性树胶。4.4 NaCl. SC/T7205.1—20074.5吉姆萨氏染液按附录A的规定。4.6戴维森氏AFA(DavidsonsAFA)固定液按SC/T7202.3—2007(斑节对虾杆状病毒病诊断规程第3部分：组织病理学诊断法)附录A的规定。4.73%戊二醛按SC/T7205.3--2007（牡蛎包纳米虫病诊断规程第3部分：透射电镜诊断法）附录A的规定。4.81%钱酸按SC/T7205.3-2007(牡蛎包纳米虫病诊断规程第3部分：透射电镜诊断法）附录A的规定。4.9 0.22μm滤膜。4.10吸水纸。5仪器设备5.1显微镜：带高倍镜（40×）和油镜（100×）。5.2载玻片。5.3盖玻片。5.4解剖刀。5.5镊子。6操作步骤6.1印片制作6.1.1样品的采集按附录B执行。6.1.2取活体牡蛎的卵巢或心脏组织(心室)在载玻片上印迹，制成涂片，涂片自然干燥后在甲醇中固定5 min-7 min。空气干燥。6.2染色6.2.1将于燥的涂片移入吉姆萨氏染液中染色，3张～4张片子用不同的染色时间染色15min～50min作试样。6.2.2染色后用缓慢的自来水流小心冲洗。6.2.3让玻片在室温空气中晾于。6.2.4中性树胶封片。7结果判定7.1在油镜下放大1000倍，有哪些信誉好的足球投注网站不同的视野进行检查。光镜下包纳米虫大小约2