SNT 2539-2010动物源性食品中乙氧喹啉残留量的测定方法 高校液相色谱法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2539—2010动物源食品中乙氧喹琳残留量的测定方法高效液相色谱法一Determination of ethoxyquin residues in foodstuffs of animal origin-HPLC method2010-03-02发布2010-09-16实施中华人民共和国发布10015国家质量监督检验检疫总局数码防伪 SN/T 2539—2010言前本标准的附录 A、附录 B和附录 C均为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国湖南出人境检验检疫局。本标准主要起草人：颜鸿飞、张莹、孙菲、胡宇东、黄志强、付善良、李拥军、王美玲。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。1 SN/T 2539—2010动物源食品中乙氧喹琳残留量的测定方法高效液相色谱法1 范围本标准规定了猪肉、猪肝、猪肾、鸡肉、鱼肉、鸡蛋、蜂蜜、牛奶中乙氧喹啉残留量的液相色谱测定和高效液相色谱-质谱确证方法。本标准适用于猪肉、猪肝、猪肾、鸡肉、鱼肉、鸡蛋、蜂蜜、牛奶中乙氧喹啉残留量的测定和确证。2方法提要试样加人碳酸钠溶液和丙酮振荡提取后，用正已烷进行液-液萃取分配，提取液经浓缩定容后，用配荧光检测器的高效液相色谱仪测定，外标法定量，高效液相色谱-串联质谱仪确证。3试剂和材料除特殊注明外，所有试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水。3.1 丙酮:HPLC级。3.2正已烷:HPLC级。3.3 乙腈:HPLC级。3.4碳酸钠。3.5乙酸铵：色谱纯。3.6碳酸钠溶液（100g/L）：准确称取100g碳酸钠（3.4）于烧杯中加人适量水溶解，转移至1L容量瓶,定容至刻度,摇匀。3.7乙酸铵溶液（20 mmol/L）：称取1.54 g乙酸铵（3.5），溶解于1L水中。3.8乙氧喹啉标准物质（ethoxyquin,CAS编号：91-53-2,C14HigNO）：纯度大于等于 98.0%。3.9乙氧喹啉标准储备溶液：准确称取适量标准品，用乙睛稀释配制成100 ug/mL的标准储备液，0℃～4℃下暗处保存。3.10乙氧喹啉标准工作液：根据检测需要移取一定体积的标准中间溶液用乙睛逐级稀释成适当浓度的标准工作溶液。标准工作溶液需现配现用。4仪器和设备4.1.高效液相色谱仪：配有荧光检测器(FLD）。4.2高效液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子化源(ESI）。4.3组织捣碎机。4.4 离心机:6 000 r/min。4.5涡旋混匀器。4.6旋转蒸发仪。4.7分析天平：感量 0.0001g和0.01g。4.8氮气浓缩仪。4.9有机滤膜：0.45μm。 SN/T 2539--20105试样制备与保存5.1试样制备5.1.1 肉及动物内脏取有代表性样品500 g,将其切碎后，用组织捣碎机将样品加工成浆状，混匀,装人洁净的盛样容器内，密封并标明标记。5.1.2蜂蜜及牛奶取有代表性样品500g，倒入洁净的塘瓷混样桶中，充分搅拌均匀，装人洁净的盛样容器内，密封并标明标记。5.2试样保存蜂蜜试样于4℃保存；牛奶、肉及内脏制品等试样于18℃下冷冻保存。在制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。6测定步骤6.1提取与净化称取 2 g 均匀试样(精确至 0.01 g)于50 mL具塞离心试管中,加人 5mL碳酸钠溶液(3.6)置于涡旋混匀器上混匀2min，加人5mL两酮（3.1)置于涡旋混匀器上振荡2min，加人15mL正已烷（3.2），在涡旋混匀器振荡提取 2min,6 Q00 t/min离心3-mtn,取士层正已烷层于200mL鸡心瓶中，用 15mL正已烷再重复提取两次，合并正己烷层于鸡心瓶中将提取液于30℃水浴下旋转浓缩至约1mL，用平缓氮气流吹至近干，用乙睛溶解并定容至1.0mL，过滤膜后供高效液湘色谱仪测定和高效液相色谱-串联质谱仪确证。6.2测定6.2.1高效液相色谱测定条件色谱柱:C18，150mm×4mm（内径）5 μm，或相当者；a)b)色谱柱温度：25℃；流动相：乙酸铵水溶液k20mmol/L）-卡乙腈+3)(V/V);1c)荧光检测器：激发波长360.nm，发射披长:435nm；d)e)流速:0.50 mL/min;f)进样量：10 μL。高效液相色谱-串联质谱仪测定条件6.2.2高效液相色谱条件色谱柱:C18，150mm×4.6 mm内径)5 μm或相当者;a)b)色谱柱温度：25℃；c)流速:0.50 mL/min;d)梯度洗脱程序：见表1表 1高效液相色谱-串联质谱仪梯度洗脱程序乙腈/%流速/(mL/min)5 mmol/L乙酸铵水溶液/%时间/min60400. 506040 30. 510900. 560. 5109096040110.540600.