SN_T 3959-2014甜菜中转基因成分检测 普通PCR方法和实时荧光PCR方法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3959—2014甜菜中转基因成分检测普通PCR方法和实时荧光PCR方法Detection of genetically modified components in sugarbeet--Conventional PCRmethod and real time PCR methods2014-04-09发布2014-11-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 3959-2014前言本标准按照 GB/T 1.1--2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国上海出人境检验检疫局、中华人民共和国厦门出人境检验检疫局、中华人民共和国黑龙江出人境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院本标准主要起草人：张舒亚、陈双雅、吕蓉、李想、高琴、刘月明、杨捷琳、栾凤侠、朱水芳、潘良文。 SN/T 3959—2014普通 PCR甜菜中转基因成分检测方法和实时荧光PCR方法1范围本标准规定了甜菜及加工产品中转基因成分检测的普通PCR和实时荧光PCR方法。本标准适用于甜菜及加工产品中转基因成分的定性检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T19495.2转基因产品检测实验室技术要求3术语、定义和缩略语下列术语、定义和缩略语适用于本文件。3.1术语和定义3.1.1转基因transgene将物种本身不具有的、来源于其他物种的功能DNA序列,通过生物工程技术,使其在该物种中进行表达，以便使该物种获得新的品种特征。3.1.2实时荧光 PCR real-time fluorescent polymerase chain reaction; RT-PCR实时荧光聚合酶链式反应。是指在聚合酶链式反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,荧光信号的强弱直接反映模板数量。3.1.3内源基因endogenous gene在检测物种中拷贝数恒定的、不显示等位基因变化的基因。该基因可用于判定物种特异性。3.1.4外源基因exogenous gene利用生物工程技术转人的其他生物基因，使该生物品种表现新的生物学性状。3.2缩略语Ct 值：cycle threshold,每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数。CTAB:cetyltrithylammonium bromide，十六烷基二甲基溴化铵。EDTA:ethylene diaminetetraacetic acid,乙二胺四乙酸。Tris:tris(hydroxymethyl)aminomethane,三(羟甲基)氨基甲烷。 SN/T 3959—2014TE缓冲液:Tris-HCI、EDTA缓冲液。PCR:polymerase chain reaction,聚合酶链式反应。DNA:deoxyribonucleic acid,脱氧核糖核酸。dNTP:deoxyribonucleoside triphosphate,脱氧核苷三磷酸。dATP:deoxyadenosine triphosphate,脱氧腺苷三磷酸。dCTP:deoxycytidine triphosphate，脱氧胞苷三磷酸。dGTP:deoxyguanosine triphosphate,脱氧鸟苷三磷酸。dUTP:deoxyuridine triphosphate，脱氧尿苷三磷酸。Taq 酶:DNA 聚合酶。UNG 酶:uracil-N-glycosylase,尿嘧啶-N-糖基化酶(UNG)酶。bp:base pair,碱基对。GS:glutamine synthetase,谷氨酰胺合成酶。FMV 35S:35S promoter from figwort mosaic virus,玄参花叶病毒 35S启动子。CaMV 35S:35S promoter from cauliflower mosaic virus,花椰菜花叶病毒 35S 启动子。EPSPS:5-enolpyruvylshkimate-3-phosphate synthase gene,5-莽草酸-3-磷酸合酶基因。E9 3:E9 3terminator from pea，豌豆的核酮糖-1,5二磷酸羧化酶 E9 3终止子。NOS:terminator of nopaline synthase gene，胭脂碱合成酶基因终止子。4　方法提要样品经研磨后，提取样品 DNA，以 DNA为模板，采用内源基因和外源基因特异性检测引物和探针进行普通PCR或实时荧光PC