SN 1579-2005椰子致死黄化植原体检测方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1579—-2005椰子致死黄化植原体检测方法Determination of coconut lethal yellowing phytoplasma2005-05-20 发布2005-12-01实施中华人民共和国发布女码防伪国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1579—2005前言本标准的附录 A、附录B和附录 C均为规范性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国海南出人境检验检疫局。本标准主要起草人：李伟东、李继勇、张宁。本标准为首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T 1579—2005椰子致死黄化植原体检测方法1范围本标准规定了植物检疫中椰子致死黄化植原体的检疫检测方法。本标准适用于植物检疫中棕榈科植物(包括种果、苗木等繁殖材料)椰子致死黄化植原体的检疫检测。2原理2.1椰子致死黄化植原体学名:Coconut Lethal Yellowing Phytoplasma缩写:CLYP分类地位：原核生物界（Prokaryiotes）；软壁菌门（Tenericute）；软球菌纲（Mollicutes）：植原体属(Phytoplasmata) .2.2寄主范围椰子(Cocos nucifera)、轮羽椰（Allagoptera arenaria）、香榔（Arenga engleri）、糖棕(Borassusflabellifer)、Arikuryroba schizophylla、短穗鱼尾葵（Caryota mitis）、Caryotarumphiana、散尾葵(Chrysalidocarpus lutescens）、长柄贝叶棕（Corypha elata）、环羽椰（Dictyosperma album）、三角(Dypsis decaryi)、油棕(Elaeis guineensis)、Gaussia attenuata、卷叶豪威椰(Howea belmoreana)、棍棒椰(Hyophorbe verschaffeltii）、彩叶棕属(Latania spp.）、蒲葵(Livistona chinensis）、圆叶蒲葵（Livistona rotundifolia）、中东矮棕（Nannorrhops richiana）、加那利枣椰（Phoenit canariensis）、枣椰（P.dactylifera)、非洲枣椰(P.reclinata)、岩枣椰(P.rupicola）、橙枣椰(P.sylvestris)、Pritchardia affi-nis、太平洋棕(P. pacifica)、P.remota、国王椰（P.thurstonii)、Ravenea hildebrandtii、棕榈（Trachy-carpus fortunei)、圣诞椰(Veitchia merrilli)、瓦努阿图圣诞(V.montgomervana)。2.3 寄主症状椰子幼树症状：主要表现为黄叶以及矛叶和心部的坏死。结果树症状：成熟前椰果脱落；开放或未开放的佛焰苞花序坏死；旗叶先变成黄褐色，然后由下往上褪绿变黄;矛叶和心部腐烂;树冠倒塌;根系腐烂。2.4地理分布北美洲：美国(佛罗里达州和得克萨斯州）、墨西哥。中美洲和加勒比海地区：开曼群岛、巴哈马、古巴、牙买加、海地、苏里南、多米尼加、伯利兹、洪都拉斯。非洲：加纳、多哥、尼日利亚、贝宁、坦桑尼亚、肯尼亚、莫桑比克、喀麦隆、莫桑比克。2.5植原体形态特征椰子致死黄化植原体形态为近球形、椭圆形、圆筒形、念球状、丝状等多种形态，它们常处于二均分裂状态，其大小为0.42μm～2 μm，最长的为念球状可达 16 μm以上。2.6传播途径田间主要通过昆虫介体传播，昆虫介体主要是蜡蝉（Myndus crudus Van Duzee）。染病种苗的转运等人为途径使得植原体远距离传播。2. 7组织病理学特性受植原体感染的植物材料组织经DAPI染色后，能在显微镜下直接观察到韧皮部筛管细胞中植原1 SN/T 1579—2005体特异的DNA荧光光点。2.8 分子生物学特性以染色体DNA为基础的分子生物学技术已用来检测和鉴定植原体。根据16SrRNA基因保守序列设计通用引物和植原体椰子致死黄化组16SrIV特异性引物，应用PCR技术进行检测。3仪器设备、用具及试剂3.1仪器设备PCR扩增仪、多功能电泳仪、冷冻高速离心机、紫外光透视仪、震荡器、冰箱、水浴锅、透射式电子显微镜、电子分析天平（感量0.1mg）、超薄切片机、生物研究显微镜等。3.2用具微量可调移液器(0.01 μL～2 μL,1μL～10 μL,10 μL～100 μL;10 μL～1 000 μL)、可调移液器头、刀片、Eppendorf管、研钵等。3.3试剂PCR检测