SC_T 7214.1-2011鱼类爱德华氏菌检测方法 第1部分：迟缓爱德华氏菌.pdf

ICS 11.220B 41SC中华人民共和国水产行业标准SC/T7214.1—2011鱼类爱德华氏菌检测方法第1部分：迟缓爱德华氏菌Detection methods for Edwardsiella from fish-Part 1: Edwardsiella tarda2011-09-01发布2011-12-01实施中华人民共和国农业部发布 SC/T 7214.1—2011前言SC/T7214-2011《鱼类爱德华氏菌检测方法》分为3部分：第1部分：迟缓爱德华氏菌；第2部分：爱德华氏菌；第3部分：保科爱德华氏菌。本部分为SC/T7214一2011的第1部分。本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草，请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由中华人民共和国农业部渔业局提出。本部分由全国水产标准化技术委员会（SAC/TC156)归口。本部分起草单位：中国水产科学研究院珠江水产研究所。本部分主要起草人：赵飞、姜兰、邹为民、谭爱萍、陆小、罗理、王伟利。 SC/T 7214.1—2011鱼类爱德华氏菌检测方法第1部分：迟缓爱德华氏菌1范围本部分规定了鱼类迟缓爱德华氏菌的采样程序、细菌鉴定方法与结果判定指标。本部分适用于鱼类迟缓爱德华氏菌的检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T4789.28-—2003食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法GB/T18652致病性嗜水气单胞菌检验方法SC/T7014—2006水生动物检疫实验技术规范3试剂、染色液与培养基检验中所需试剂、染色液与培养基的配制按GB/T4789.28、GB/T18652或SC/T7014中的规定执行；聚合酶链式反应（PCR）测定用水应符合GB/T6682中一级水的规格，且要用焦炭酸二乙酯(DEPC)处理水（A.1），上述未提及的见附录A。16SrRNA基因DNA序列扩增引物，P1：5－AGAGTTTGATCCTGGCTCAG－3，P2：5°GGTTACCTTGTTACGACTT-3，20℃保存。4设备和器械超净工作台、生物显微镜、PCR仪、电泳仪、微生物检测必备辅助设备和器械等。5细菌分离与培养5.1取样取鱼的肝、肾及病灶组织。从取样组织中直接分离接种；在无菌环境中将样品置于无菌离心管中，用无菌盐水冲洗并捣碎，然后分离接种。5.2分离培养样品接种在血液琼脂平板（按GB/T4789.28一2003中4.6规定的方法配制），按常规法划线。28℃培养24h～48h。然后，从中挑取灰白色、圆形、湿润、呈半透明状的单菌落在普通营养琼脂平板（按GB/T4789.28一2003中4.7规定的方法配制）进行纯化培养。6革兰氏染色按GB/T4789.28—2003中2.2的规定执行。1 SC/T7214.1--20117生理生化试验7.1硫化氢试验按GB/T4789.28一2003中3.14的规定执行。培养基变黑色为阳性，不变黑色为阴性。7.2运动性试验半固体琼脂按GB/T4789.282003中4.30的方法配制。把待检菌穿刺接种于半固体琼脂，28℃培养24h。若待检菌由穿刺线向四周扩散，其边缘呈云雾状，为运动性阳性；若待检菌只生长在穿刺线上，边缘十分清晰，为运动性阴性。7.3氧化酶试验以毛细管吸取四甲基对苯二胺的1%水溶液滴在细菌的菌落上。菌落呈玫瑰红色、深紫色为阳性，不变色为阴性。7.4丙二酸盐利用试验按GB/T4789.28一2003中3.7的规定执行。培养基由绿色变为蓝色为阳性，不变蓝色为阴性。7.5吲哚试验按SC/T7014一2006表2的吲哚（靛基质)试验的规定执行。培养基变红色为阳性，不变红色为阴性。7.6甲基红(M.R)试验按SC/T7014一2006表2的甲基红（M.R)试验的规定执行。培养基变红色为阳性，不变红色为阴性。7.7赖氨酸脱羧酶试验按GB/T4789.28--2003中3.12的规定执行。试验管培养基呈紫色、对照管培养基呈黄色为阳性，试验管培养基不呈紫色、对照管培养基呈黄色为阴性。7.8β-半乳糖苷酶(ONPG)试验按GB/T4789.28一2003中3.3的规定执行。培养基变黄色为阳性，不变黄色为阴性。7.9糖、醇类(D-葡萄糖、蔗糖、L-阿拉伯糖、海藻糖、D-甘露醇)发酵试验将待检菌穿刺接种于糖、醇类发酵试验培养基（配制方法见A.2)，28℃培养24h后观察。培养基变黄色为阳性，不变黄色为阴性。816SrRNA基因DNA的序列测定和同源性分析试验8.1DNA提取8.1.1将5.2分离纯化的待检菌接种于普通营养液