SNT 1763.1-2006出入境口岸生物毒素检验规程 第1部分：肉毒毒素.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1763. 1—2006出入境口岸生物毒素检验规程第1部分：肉毒毒素Examination codes for biological toxin at entry-exit port-Part 1 :Botulism neurotoxin2006-04-25 发布2006-11-15 实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局一数稀防伪 SN/T 1763. 1—2006前 言SN/T1763《出人境口岸生物毒素检验规程》共分为三个部分：第1部分：肉毒毒素;第2部分：金黄色葡萄球菌肠毒素B;第3部分：麻毒素。本部分是SN/T1763的第1部分。本部分附录A为规范性附录,附录B为资料性附录。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分由中华人民共和国广东出人境检验检疫局负责起草，军事医学科学院微生物流行病研究所全军微生物检验研究中心参加起草。本部分主要起草人：吕志平、雷达、吴烽、丁国允、康琳、端青、檀华、王景林、闫剑勇。本部分系首次发布的出人境检验检疫行业标准。1 SN/T 1763. 1—2006出入境口岸生物毒素检验规程第1部分：肉毒毒素1范围SN/T1763的本部分规定了在出人境口岸对非临床来源样品检验肉毒毒素的程序和方法。本部分适用于在出人境口岸对可疑食品、水源和土壤及其他可疑污染物等非临床来源样品进行肉毒毒素检验。2规范性引用文件下列文件中的条款通过SN/T1763的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的必威体育精装版版本。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本适用于本部分。一：GB/T4789.12—2003食品卫生微生物学检验肉毒梭菌及肉毒毒素检验GB194892004　实验室　生物安全通用要求WS 233一2002微生物和生物医学实验室生物安全通用准则3 术语和定义下列术语和定义适用于SN/T1763的本部分。3. 1生物毒素 biological toxin一类由活的有机体如：微生物、动物、植物分泌或代谢产生的有特殊活性的并对其他生物物种有毒的物质。3.2肉毒毒素botulinum neurotoxin,BoNT厌氧条件下，由肉毒梭菌分泌的神经毒性外毒素,分为BoNT/A一G共七型。4实验生物安全要求4.1实验室应按照GB19489--2004和WS233—2002对生物安全2级(BSL-2)实验室的生物安全要求。动物实验时应按照GB19489—2004对动物生物安全2级（ABSL-2)实验室的生物安全要求。4.2当进行可能产生气溶胶或液体溅出的操作，或者可产生大量毒素时，除4.1外，应同时按照GB19489--2004和WS233—2002中6.3.1对BSL-3安全设备和个体防护的要求执行。4.3从事肉毒毒素检验工作的人员应接种肉毒类毒素疫苗。4.4使用过的实验用品应按照GB19489—2004对废弃物进行无害化处理。5 检验对象液体样品；固体或半流动体样品； SN/T 1763. 1—2006一地表面及物体表面样品；草等植物样品。6设备Ⅱ级生物安全柜、高压蒸汽灭菌器、普通冰箱、普通台式离心机(带密封的离心安全杯)、冷冻离心机（带密封的离心安全杯）、普通恒温培养箱、酶标仪、洗板机。7样品制备7.1液体样品可取适量样品直接离心10min(1000×g～3000×g），取上清液备用。7.2固体或半流动体样品7.2.1在无菌容器中对样品称量后，将样品转移到无菌研钵。7.2.2如样品为罐装样品，则应首先用肥皂水擦拭罐顶，水冲洗，去除过多的水，用70%酒精擦拭表面。.7.2.3在研钵中加适量（如等量、倍量或5倍量等）pH6.50.2%明胶磷酸盐缓冲液或生理盐水，浸泡或研碎，4℃冷冻离心，直至上清液完全澄清，取上清液备用。7.3地表面及物体表面样品将棉拭子插入明胶磷酸盐缓冲液浸湿,在地表面或物体表面均匀涂抹约10 cm²大小的表面，然后再浸人盛有10mL明胶磷酸盐缓冲液的试管中，充分振荡，移人离心管，同前离心取上清液备用。7.4草等植物样品7.4.1用镊子取干草叶1片～20片（约2g),绿草叶10片（约2g)置清洁平皿中，加人10mL明胶磷酸盐缓冲液，用10mL吸管充分冲洗草叶表面，移人离心管，离心10min也可室温静置20min)取上清液备用。7.5上述所有上清液均一式两份，1份直接接种动物，另1份用盐酸调pH6.2～6.5,按9：1的比例将样品与10%胰酶（活力1：250)水溶液混匀，轻轻搅动。37℃作用1h后接种动物。8检验程序8.1胶体金免疫层析试验和酶联免疫吸附试验是初筛试验，小白鼠腹腔注射试验为确认试验。8.2应先进行两种