NY_T 1471-2017牛毛滴虫病诊断技术.pdf

ICS 11.220B 41NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 1471—2017代替NY/T1471—2007牛毛滴虫病诊断技术Diagnostic techniques for bovine trichomoniasis2017-06-12发布2017-10-01实施中华人民共和国农业部发布 NY/T1471—2017前言本标准按照GB/T1.1—-2009给出的规则起草。本标准代替NY/T1471—2007《牛毛滴虫病诊断技术》。与NY/T1471—2007相比，除编辑性修改外，主要技术变化如下：病原PCR检查时增加了一对可用PCR引物。本标准由农业部兽医局提出。本标准由全国动物卫生标准化技术委员会（SAC/TC181)归口。本标准起草单位：南京农业大学、中国动物卫生与流行病学中心。本标准主要起草人：李祥瑞、徐立新、严若峰、宋小凯、郑增忍本标准所代替标准的历次版本发布情况为：-NY/T1471—2007。1 NY/T1471—2017引言毛滴虫病是由胎儿三毛滴虫（Tritrichomonasfoetus）寄生于牛生殖道引起的疾病。该病呈世界性分布，引起牛，尤其是奶牛生殖器官炎症、死胎、流产和不育，可对畜牧业生产造成严重的经济损失。毛滴虫病被世界动物卫生组织列为通报传染病。该病主要通过自然交配传播，已染病动物的精液和污染的器械人工授精也可引起传播。I NY/T1471—2017牛毛滴虫病诊断技术1范围本标准规定了牛毛滴虫病的病原显微镜检查技术和聚合酶链反应(PCR)扩增虫体DNA的检测方法。本标准适用于牛毛滴虫病的诊断。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法GB19489实验室生物安全通用要求3缩略语下列缩略语适用于本文件。CTAB：hexadecyltrimethylammoniumbromide，十六烷基三甲基溴化铵。DNA：deoxyribonucleicacid，脱氧核糖核酸。dNTP：deoxynucleosidetriphosphate，三磷酸脱氧核苷酸。PBS:phosphatebuffersolution，磷酸盐缓冲液。PCR:polymerase chain reaction，聚合酶链反应。Taq酶：Taq DNA polymerase，Taq DNA聚合酶。4生物安全措施进行牛毛滴虫病实验室检测时，如显微镜检查、DNA提取等，按照GB19489的规定执行。5临床诊断5.1临床症状5.1.1公牛公牛很少或没有临床症状发生。若有症状，主要包括黏液性包皮炎，包皮肿胀，并分泌出大量脓性物质；包皮黏膜上出现粟粒大的红色结节，有痛感，不愿交配。5.1.2母牛母牛出现阴道损伤，卡他性炎症，阴道红肿；黏膜出现粟粒大或更大的小结节，排出黏液性分泌物；宫颈和子宫内膜出现炎症；随后发生不规则的发情，子宫脱垂、子宫积脓和早期（1周～16周)流产。5.2结果判定根据牛交配、人工授精或母牛的生殖系统检查史，公牛具有5.1.1临床表现、母牛具有5.1.2临床表现时，可判定为疑似牛毛滴虫病6实验室诊断6.1样品的采集与运输1 NY/T1471—20176.1.1样品的采集母牛选择发情后1d～2d的母牛，用水将母牛外生殖器洗涤干净。然后，采用下列任何一种方法采样：a）取市场上出售的常规型号的注射器，如50mL、100mL的注射器，将30mL～40mL的30℃～35℃灭菌生理盐水急速注人阴道，以洗涤子宫和阴道壁。收集洗涤液于离心管中，1500r/min～2000r/min离心5min后，取沉淀物作为待检样品。b）取一长30cm、直径0.9cm，并在离一端9cm处弯成150°角的消毒玻璃管，注人1mL～2mL的30℃～35℃灭菌生理盐水，收集母牛子宫颈黏液作为待检样品。公牛首先将公牛外生殖器洗涤干净，吸取5mL～10mL的30℃～35℃灭菌生理盐水注人包皮腔内。然后，以手压紧包皮口，使液体在腔内滞留3min～5min。再将洗涤液收集于离心管中，以1500r/min~2000r/min离心5min后，取沉淀物作为待检样品。精液取人工采集或融化的冷冻精液1mL～2mL，作为待检样品其他产仔牛、流产牛等可取胎盘液；流产胎牛可取胎儿第4胃的内容物；发病母牛可取子宫积脓排出物，以1500r/min～2000r/min离心5min后，取沉淀物作为待检样品。注：不同情况下毛滴虫的数量有所不同。在流产胎儿、流产后3d～8d内和新近感染母牛子宫里均含有大量虫体在感染后12d～20d的母牛阴道黏液内也含有大量虫体。在一个发情周期内毛滴虫的数量也有所不同，发情后3d～7d内毛滴虫的数