SN_T 4624.13-2016入境环保用微生物菌剂检测方法 第13部分：黄孢原毛平革菌.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4624.13--2016入境环保用微生物菌剂检测方法第13部分：黄孢原毛平革菌Methods for examination of import microbial blends in the environmentalprotection—Part 13 : Phanerochaete chrysosporium2017-03-01实施2016-08-23 发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 中华人民共和国出人境检验检疫行业标准入境环保用微生物菌剂检测方法第13部分：黄孢原毛平革菌SN/T 4624.13.---2016*中国标准出版社出版北京市朝阳区和平里西街甲2号（100029）北京市西城区三里河北街16号（100045）总编室：（010址 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*开本 880×1230 1/16印张 0.75字数 18千字2017年11月第一版2017年11月第一次印刷印数 1-500*书号：155066·2-32287 SN/T 4624.13—2016前言SN/T4624《人境环保用微生物菌剂检测方法》共分为17部分：-第1部分：地衣芽孢杆菌；-第2部分：短小芽孢杆菌；第3部分：巨大芽孢杆菌；第4部分：嗜酸氧化亚铁硫杆菌；1-第5部分：β型溶血性链球菌；“第6部分：金黄色葡萄球菌；第7部分：沙门氏菌；第8部分：志贺氏菌；-第9部分：致泻大肠埃希氏菌；第10部分：淡紫拟青霉；第11部分：雅致小克银汉霉；第12部分：哈茨木霉；第13部分：黄孢原毛平革菌；第14部分：焦曲霉；第15部分：解淀粉芽孢杆菌；第16部分：类产碱假单胞菌；-一第17部分：恶臭假单胞菌。本部分为SN/T4624的第13部分。本部分按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局。本部分主要起草人：李俊环、李姝、付海滨、吴渺渺、王芳、贾金生、李成镛。 SN/T 4624.13---2016入境环保用微生物菌剂检测方法第13部分：黄孢原毛平革菌1范围SN/T4624的本部分规定了入境环保用微生物菌剂符合性检验黄孢原毛平革菌的形态学鉴定、PCR 检测方法。本部分适用于人境环保用微生物菌剂符合性检验黄孢原毛平革菌检测和鉴定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682　分析实验室用水规格和试验方法3主要试剂和培养基实验用水应符合 GB/T6682 中一级水的规格。3.13.2马铃薯葡萄糖琼脂：见附录 A中 A.1。马铃薯葡萄糖肉汤：见A.2。3.33.4CTAB缓冲液:见 A.3。3.5蛋白酶K。3.6Tris 饱和酚。3.7三氯甲烷。3.8异戊醇。3.9 异丙醇。TE缓冲液(pH8.0):见 A.4。3.1010×PCR缓冲液:200 mmol/L Tris-HCl(pH8.4),200 mmol/L氯化钾(KCI)15 mmol/L氯化镁3.11(MgCl2) 。3.12dNTP:dATP,dTTP、dGTP、dCTP。TBE:54 gTris,27.5 g 硼酸,800 mL 去离子水溶解,20 mL 0.5 mol/L EDTA(pH8.0)定容至 1 L。3.133.14Taq DNA 聚合酶。3.15真菌基因组 DNA 提取试剂盒。3.1650XTAE缓冲液(pH8.5):见 A.5。3.17琼脂糖。3.18溴化乙锭。3.19DNA 分子量标记:100 bp DNA ladder。3.20液氮。 SN/T 4624.13—20164主要仪器和设备4.1电子天平（感量0.01g)。4.2恒温培养箱：28℃±1℃。4.3恒温振荡器：28℃±1℃。4.4恒温水浴锅。4.5台式冷冻离心机(最高转速15 000 r/min)。4.6PCR超净工作台。4.7PCR扩增仪。4.8微量移液器和灭菌吸头:10 μL、20 μL、200 μL、1000 μL。4.9高压灭菌锅。4.10电泳仪装置。4.11核酸/蛋白分析仪。4.12凝胶成像系统。4.13陶瓷研钵。4.14无菌培养Ⅲ：直径90 mm。4.15灭菌三角烧瓶：500mL、250mL。4.16接种棒、镍铬丝。4.17Eppendorf 管和 PCR反应管。4.18显微镜：物镜10×～100×。5样品制备5.1无菌操作取1g(mL)样品加人到100mL无菌水中混匀，移取1环菌连续划线接种5个PDA平板，28℃土1℃培养5d,观察琼脂平板上的菌落特征。取样过程中，在样品旁边放置1个PDA平