SN_T 2120-2014流行性溃疡综合症检疫技术规范.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/替SN/T2120—2008流行性溃疡综合症检疫技术规范Quarantine protocol for epizootic ulcerative syndrome2015-05-01实施2014-11-19发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局刮涂层查真伪 SN/T2120-—2014前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准代替SN/T2120一2008《流行性溃疡综合症检疫技术规范》。本标准与SN/T2120-2008相比，主要技术变化如下：增加了采样；增加了临床症状；对诱导次级游走孢子进行了修改；对PCR中样品的处理方法进行了修改；一一对PCR试验引物进行了修改；一对PCR试验条件进行了调整和优化；一对结果判定进行了修改。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国深圳出入境检验检疫局、深圳市检验检疫科学研究院、中华人民共和国广东出人境检验检疫局。本标准主要起草人：史秀杰、邱杨、于力、贾鹏、王津津、郑晓聪、刘建丽、何俊强、兰文升、刘、赵丽。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：SN/T2120--2008。1 SN/T 2120—2014流行性溃疡综合症检疫技术规范1范围本标准规定了各种淡水与半咸水鱼流行性溃疡综合症的病原分离、鉴定及诊断方法。本标准适用于各种淡水与半咸水鱼流行性溃疡综合症的检疫和疫病监测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T18088出人境动物检疫采样GB19489实验室生物安全通用要求3概述流行性溃疡综合症（EpizooticUlcerativeSyndrome），又称红点病（RSD）、霉菌性肉芽肿（MG）、霉菌性溃疡（UM），是由丝囊霉（Aphanomycesinvadans或者A.piscicida）引起的野生及养殖的淡水与半咸水鱼类的季节性流行病，主要表现为侵人性丝囊霉感染和坏死性溃疡病变，特征性地引起肉芽肿性反应，简称EUS（参见附录A）4试剂和材料4.1水：用于PCR(包括核酸抽提）的水要用DEPC处理，以除去DNA酶和RNA酶。其余用水应符合GB/T6682一级水的规格。4.2丝囊霉参考株：由指定单位提供。4.3TagDNA聚合酶：一20℃保存，不要反复冻融或温度剧烈变化，4.4dNTPs:含 dCTP、dGTP、dATP、dTTP各 10 mmol/L。4.5引物：两对引物，浓度为40μmol/L，序列为：Ainvad-2F:5-TCA-TTG-TGA-GTG-AAA-CGG-TG-3Ainvad-ITSR1:5-GGC-TAA-GGT-TTC-AGT-ATG-TAG-3扩增丝囊霉ITS1rDNA基因中的234bp的DNA片断。ITS11:5-GCC-GAA-GTT-TCG-CAA-GAA-AC-3ITS23:5-CGT-ATA-GAC-ACA-AGC-ACA-CCA-3扩增丝囊霉ITS1rDNA基因中的550bp的DNA片断。4.6无水乙醇：分析纯，使用前预冷到一20℃。4.710%福尔马林。4.8酒精：70%、80%、95%及无水酒精。1 SN/T 2120—20144.9二甲苯。4.10中性树脂。4.11石蜡。4.12Harris氏苏木精染液。4.130.5%伊红酒精溶液。4.141%盐酸酒精溶液。55器材和设备5.1手术刀和镊子。5.2载玻片和盖玻片。5.3培养皿。5.4恒温培养箱。5.5普通冰箱和超低温冰箱。5.6倒置显微镜。5.7研钵。5.8离心机和离心管。5.9微量移液器及吸头。5.10PCR扩增仪。5.11电泳仪。5.12紫外观察灯或凝胶成像仪。5.13标本缸。5.14包埋机。5.15切片机。6流行性溃疡综合症的诊断6.1病原分离鉴定的实验室环境条件应符合GB19489的要求6.22诊断原则EUS的诊断基于出现临床症状后，通过患病组织病理检查观察到特征性的霉菌性肉芽肿，或者从患病组织分离到丝囊霉，经生物学或PCR方法鉴定。6.33临床症状病鱼体表通常出现红斑或小的溃疡，并进一步发展成大的溃疡性损伤。发病早期，体表、头部、鳃盖和尾柄等处有红斑；后期发展到背部和腹侧部皮肤表面呈现大面积的红、灰色溃疡并伴有棕红色坏死灶。高度易感鱼类其损伤更加广泛，身体的后半部分几乎完全腐烂，或其头盖骨处的软、硬组织均坏死，导致鱼虽未死但脑组织却暴露在外。6.4采样根据GB/T18088规定的数量取样。选取临床症状轻微、表皮有溃疡症状或红斑的活的病鱼。紧靠溃疡或溃疡下面的肌肉组织最适合分离卵菌