NYT 1156.1-2006农药室内生物测定试验准则 杀菌剂 第1部分：抑制病原真菌孢子萌发试验 凹玻片法.pdf

ICS 65.100B 17NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 1156.12006杀菌剂农药室内生物测定试验准则第1部分：抑制病原真菌孢子萌发试验[凹玻片法Pesticides guidelines for laboratory bioactivity testsPart 1: Determining fungicide inhibition of pathogen spore germinationon concave slides2006-10-01实施2006-07-10发布中华人民共和国农业部3发布 NY/T1156.1—2006前言《农药室内生物测定试验准则杀菌剂》为系列标准，本部分是《农药室内生物测定试验准则杀菌剂》的第1部分。本标准由中华人民共和国农业部提出并归口。本标准起草单位：农业部农药检定所。本标准主要起草人：徐文平、朱春雨、吴新平、张弘、邱涧平。本标准由农业部农药检定所负责解释。I NY/T1156.1—2006农药室内生物测定试验准则杀菌剂第1部分：抑制病原真菌孢子萌发试验凹玻片法1范围本部分规定了杀菌剂抑制病原真菌孢子萌发试验的基本要求和方法。本部分适用于杀菌剂对病原真菌孢子萌发抑制作用测定的农药登记室内试验，其他试验参照本部分执行。2试验条件2.1试验靶标试验靶标应选择容易产生孢子且孢子容易萌发、遗传和成熟度一致、便于镜检的病原真菌，如稻瘟病菌（Pyricularia oryzae）、梨黑星病菌（Venturiapirina）等。记录菌种来源。2.2仪器设备2.2.1离心机；2.2.2电子天平(感量0.1mg);2.2.3显微镜；2.2.4培养箱；2.2.5培养皿；2.2.6计数器；2.2.7载玻片；2.2.8凹玻片；2.2.9移液管或移液器等。3试验设计3.1试材准备将试验用病原真菌在适宜的培养基上培养，或将病组织保湿培养，待产生孢子后备用。3.2药剂3.2.1试验药剂试验药剂采用原药（母药），并注明通用名、商品名或代号、含量和生产厂家。3.2.2对照药剂对照药剂采用已登记注册且生产上常用的抑制孢子萌发的杀菌剂原药。3.3试验步骤3.3.1孢子悬浮液配制将培养好的病原真菌孢子用去离子水从培养基或病组织上洗脱、过滤，离心(1000r/min)5min，倒去上清液，加人去离子水，再离心。最后用去离子水将孢子重悬浮至每毫升1×105个～1×107个孢子，并加人0.5%葡萄糖溶液。3.3.2药剂配制1 NY/T1156.1—2006水溶性药剂直接用水溶解稀释。其他药剂选用合适的溶剂（如甲醇、丙酮、二甲基甲酰胺或二甲基亚矾等）溶解，用0.1%的吐温80水溶液稀释。根据药剂活性，设置5个～7个系列质量浓度，有机溶剂最终含量不超过2%。3.3.3药剂处理用移液管或移液器从低浓度到高浓度，依次吸取药液0.5mL分别加入小试管中，然后吸取制备好的孢子悬浮液0.5mL，使药液与孢子悬浮液等量混合均匀。用微量加样器吸取上述混合液滴到凹玻片上，然后架放于带有浅层水的培养血中，加盖保湿培养于适宜温度的培养箱中。每处理不少于3次重复，并设不含药剂的处理作空白对照。4调查当空白对照抱子萌发率达到90%以上时，检查各处理抱子萌发情况。每处理各重复随机观察3个以上视野，调查孢子总数不少于200个，分别记录萌发数和孢子总数。孢子芽管长度大于孢子的短半径视为萌发。本试验还应观察记录芽管生长异常情况、附着胞形成数等。5数据统计与分析5.1计算方法根据调查数据，计算各处理的孢子萌发相对抑制率，单位为百分率（%）。按公式（1）、（2)计算，计算结果保留小数点后两位：Ng×100..R=7(1)N式中：R—孢子萌发率；Ng—孢子萌发数；N,i-调查的孢子总数。R×100Re= Ro(2)式中：R。——处理校正孢子萌发率；Rt处理孢子萌发率；Ro———空白对照孢子萌发率。Ro=Re×100I =(3)Ro式中：I一一孢子萌发相对抑制率；Ro——空白对照孢子萌发率；R。——处理校正的孢子萌发率。5.2统计分析根据各药剂浓度对数值及对应的孢子萌发相对抑制率的几率值作回归分析，计算各药剂的EC50VECg0等值及其95%置信限。进行药剂联合毒力测定时，根据Wedly法或孙云沛法计算混剂的增效系数（SR）或共毒系数（CTC），评价混剂的联合作用类型。2 NY/T1156.1—2006Wadley法：根据增效系数(SR)来评价药剂混用的增效作用，即SR0.5为拮抗作用，0.5≤SR≤1.5为相加作用,SR1.5为增效作用。计算增效系数(SR)按公式(4)、（5)计算：PA + PBX=PA/A+PB/B(4)式中：X——混剂的ECso理论值，单位为毫克每升（mg/L）；PA——混剂中A的百分含量；PB——混剂中 B的百分含量;A-一混剂中A的ECs