NY_T 2898-2016饲料中串珠镰刀菌素的测定 高效液相色谱法.pdf

ICS 65.120B 46NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 2898—2016饲料中串珠镰刀菌素的测定高效液相色谱法Determination of moniliformin in feeds-High performance liquid chromatography2016-10-01实施2016-05-23 发布中华人民共和国农业部发布 NY/T 2898—2016前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由农业部畜牧业司提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76)归口。本标准起草单位：华中农业大学。本标准主要起草人：齐德生、张妮娅、高思、陈雷- NY/T 2898—2016饲料中串珠镰刀菌素的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了饲料中串珠镰刀菌素的高效液相色谱测定法本标准适用于谷物及其加工副产品、配合饲料、浓缩饲料和精料补充料中串珠镰刀菌素的测定。本标准的方法检出限为0.003mg/kg.定量限为0.05mg/kg。2规范性引用文件下列义件对于本义件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用义件，仅注日期的版本适用于本义件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样GB/T20195动物饲料试样的制备3原理试样中的串珠镰刀菌素经四丁基硫酸氢铵（TBAHS)水溶液提取、二氯甲烷苯取和强阴离子交换固相萃取柱净化后，采用反相高效液相色谱-紫外检测器进行测定，并用外标法定量。4试剂和材料除特别说明外，所有试剂均为分析纯和符合GB/T6682中规定的二级用水，标准溶液和流动相用水符合GB/T6682中一级用水的规定。4.1甲醇：色谱级。4.2乙睛：色谱级。4.3四丁基硫酸氢铵（TBAHS）。4.4二氯甲烷。4.5二水合磷酸二氢钠。4.6氢氧化钠。4.7提取液：称取5g四丁基硫酸氢铵（4.3），用水溶解并定容至1L.制成5g/1的四丁基硫酸氢铵溶液。4.8试剂A：称取40g四丁基硫酸氢铵（4.3），用水溶解并定容至100ml，制成400g/L的四丁基硫酸氢铵溶液。4.9试剂B：称取17.16g二水合磷酸二氢钠（4.5），用水溶解并定容至100ml，制成1.1mol/I.的磷酸二氢钠溶液。4.10离子对改性剂：试剂A(4.8)和试剂B(4.9)按照体积比1：2混合均匀后即成离子对改性剂。4.11乙晴-水溶液A：将乙睛（4.2）和水按照体积比1：1混合均匀备用。4.12乙晴-水溶液B：将乙晴（4.2）和水按照体积比8：92混合均匀备用。4.132mol/L氢氧化钠溶液：称取80g氢氧化钠（4.6).用水溶解并定容至1L。1 NY/T 2898—20164.140.05mol/L磷酸二氢钠溶液：称取7.8g二水合磷酸二氢钠（4.5）.用水溶解并定容至1L.pH为5.0.有效期为1个月。4.15流动相：取10ml.离子对改性剂（4.10），用乙睛-水溶液B（4.12）稀释至1I，并用氢氧化钠溶液（4.13）调pH为6.5.经0.22um有机微孔滤膜过滤后备用。4.16串珠镰刀菌素标准品：串珠镰刀菌素钠盐，纯度≥98%。4.17串珠镰刀菌素标准储备液：取包装规格为5mg的串珠镰刀菌素标准品，用乙晴-水溶液A（4.11）溶解定容到50ml容量瓶中，配制成100ug/ml.的串珠镰刀菌素标准储备液.转人塑料瓶中一20℃密封保存，有效期为12个月。注：其他包装规格的中珠镰刀菌素标准品可按照相应规格调整定容体积，用乙睛-水溶液A（4.11)配制成100ug/ml的中珠镰刀菌素标准储备液。4.18串珠镰刀菌素标准工作液：取10ml串珠镰刀菌素标准储备液于100mL容量瓶中，用磷酸二氢钠溶液（4.14)稀释至刻度，配制成浓度为10μg/mL的中间工作液。分别准确移取0.1ml、1.0ml、5.0ml、10.0ml、20.0mL、40.0ml.的中间工作液于100mL容量瓶中，用磷酸二氢钠溶液（4.14）稀释至刻度，配制成浓度分别为0.01μg/mL、0.1μg/ml、0.5μg/ml、1.0μg/ml、2.0μg/ml和4.0μg/ml.的标准工作液。转人塑料瓶中4℃下密封保存，有效期为3个月。5仪器和设备5.1高效液相色谱仪：配备紫外检测器或二极管阵列检测器。5.2强阴离子交换固相苯取柱（SAXSPE柱）：规格为100mg/mL，柱容量1ml。5.3氮吹仪。5.4实验室常规设备。6试样的采集与制备按照GB/T14699.1抽取有代表性的饲料样品，用四分法缩减取样。按照GB/T20195的规定将饲料样品粉碎，过0.45mm孔径试验筛，混匀后装入密闭容器中，避光低温保存备用。7分析步骤7.1提取取4g（精确到0.000