WS 223-2002乙型肝炎表面抗原酶免疫检验方法.pdf

C 50中华人民共和国卫生行业标准WS/T 223--2002乙型肝炎表面抗原酶免疫检验方法Guidelines for enzyme immuno-assay ofhepatitis B surface antigen2002~07-01实施2002-04-20 发布中华人民共和国卫生部‧发 布 WS/T 223--2002前創言乙型病毒性肝炎(简称乙肝)是由乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)引起的传染性疾病,在我国人群中感染率较高，是严重危害人民身体健康的常见传染病之一。对乙肝的诊断主要以实验室检测乙肝表面抗原(Hepatitis B surface antigen,HBsAg)为主，检测方法主要有酶免疫法、反向间接血凝法、放免法、化学发光法、免疫荧光法等，目前应用较广、较普及的是酶免疫法。本标准所使用的缩略语为 HBV、HBsAg。本标准从2002年7月1日起实施。本标准由卫生部医政司提出。本标准由北京大学医学部人民医院肝病研究所负责起草。本标准主要起草人：陶其敏、全文斌。本标准由卫生部委托卫生部临床检验中心负责解释。 中华人民共和国卫生行业标准乙型肝炎表面抗原酶免疫WS/T 223--2002检验方法Guidelines for enzyme immuno-assay ofhepatitis B surface antigen1范围本标准规定了血清 HBsAg酶免疫检验方法(两步法)中相关的技术要求。本标准适用于各基础、临床实验室和流行病学研究中血清 HBsAg 测定。2方法选择2.1常用方法HBsAg 的酶免疫检验方法根据反应模式可分为“--步法”和“两步法”两种方法。“一步法是将待测样品和酶标记抗体同时加人到反应孔中进行反应，从而达到快速的目的；“两步法”则是先将样品加人到反应孔中，待反应结束后再加人酶标记抗体，从而使待测样品的“捕反应”和酶标记抗体的“酶联反应”分开进行,因而反应更加稳定、重复性也更好。2.2　推荐方法由于“一步法”存在产生“前带现象”的可能，故在本标准中不列为推荐方法；本标谁推荐使用酶免疫“两步法”。2.3方法原理本标准推荐使用酶免疫两步法”检测HBsAg：将抗-HBs 的单克隆抗体(简称单抗)或多克隆抗体(简称多抗)包被于聚苯乙烯微孔板等固相载体上，加人待测血清，如其中含有HBsAg，则可与固相上的包被抗体结合；洗板去除不参加反应的无关蛋白成分后，加人酶（如辣根过氧化物酶)标记的第二株抗体使之与血清中 HBsAg 反应，在固相载体上形成包被抗体-血清中 HBsAg-酶标记抗体的复合物（即双抗体夹心)；再加人底物后，酶催化底物，产生显色反应，根据显色反应颜色的深浅可判定血清样品中HBsAg的有无及相对含量。3试剂和材料国内目前已有成套的试剂盒供应。显色反应底物液可选用邻苯二胺(o-phenylenediamine，OPD)-过氧化氢(H,O,)溶液（简称OPD)或3,3,5,5-四甲基联苯胺(3,3,5,5-Tetramethylbenzidine,TMB)-H,Oz溶液（简称TMB)。使用OPD时，可选用2mol/L的硫酸(H,SO.)作为终止液，比色时选用492nm作为测定波长；使用TMB时，可选用2mol/L的盐酸或2mol/L的硫酸溶液作为终止液，比色时选用450nm作为测定波长。注：国内市场目前亦有 HBsAg 检测的快速酶免疫试剂盒供应，该试剂盒系加有标本加速剂和酶标记抗体加速剂，可达到快速反应的目的，具体操作方法详见各生产厂家的试剂盒说明书。2002-07-01实施中华人民共和国卫生部2002-04-20批准1 WS/T 223-20024仪器和设备包括酶标仪、移液系统（移液器及移液器头）和恒温设备（水浴箱）等。所选用的仪器设备应满足以下要求：a）酶标仪在 450 nm 和 492 nm 的波长不精密度应≤1%，分别在 449 nm～451 nm 和 491 nm～493nm之间，吸光度（A值)要求可以测到小数点后两位；b）移液系统在100 μL 和 50μL 的移液不精密度应≤1%,分别在 99μL～101 μL和 49.5 μl,～50.5 μL,之间;c）恒温系统在37℃、43℃的温度变异应≤士1℃。5样品5.1血液样品的采取取受试者的前臂静脉血。止血带的使用时间应不超过 1 min，同时避免溶血。5.2血液样品的处理、贮存和测定前准备血液样品采取后室温下静置30min～45min使其凝血，避免溶血，2000r/min离心5min后立刻吸出血清置密封的试管中贮存。分离出的血清标本可于2C～4℃贮存1周，如需贮存更长时间,则应保存在一20℃以下,用时提前取出融化并使其温度升至室温，充分混勾后测定。保存在一20°C的标本应避免反复冻融，否则可能会影响测定结