SN_T 1379-2010古典猪瘟检疫规程.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1379—2010代替 SN/T 1379.1--2004,SN/T 1379.2--2005,SN/T 1379.3—2006古典猪瘟检疫规程Quarantine protocol for classical swine fever2011-05-01实施2010-11-01 发布人民共和国中华发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1379—2010前言本标准按照GB/T1.1-2009 给出的规则起草本标准代替SN/T1379.1-~2004《猪瘟单克隆抗体酶联免疫吸附试验》、SN/T1379.2—2005《猪瘟免疫荧光技术操作规程》和SN/T1379.3—2006《猪瘟中和免疫荧光试验操作规程》。本标准与SN/T 1379.1—2004、SN/T 1379.2—2005、SN/T1379.3—2006相比，主要技术变化如下：增加了荧光抗体实验；-增加了病毒分离试验;增加了双抗体夹心ELISA实验；修改了单克隆抗体免疫过氧化物酶实验；修改了过氧化物酶联中和实验。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准由中华人民共和国厦门出人境检验检疫局负责起草，中华人民共和国天津出人境检验检疫局、中华人民共和国广东出人境检验检疫局、中华人民共和国河南出人境检验检疫局和中华人民共和国珠海出入境检验检疫局参与。本标准主要起草人：龚艳清、董志珍、许如苏、张巨州、陈信忠、徐淑菲、孔繁德、沙才华、徐海聂。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：-SN/T 1379. 1--2004;-SN/T 1379.2—2005;-SN/T 1379.3--2006。 SN/T 1379--2010古典猪瘟检疫规程范围1本标准规定了古典猪瘟临床诊断、实验室检测的技术规范。本标准适用于古典猪瘟病毒和抗体的检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3缩略语下列缩略语适用于本文件。BD:边界病BVD:牛病毒性腹泻CSF:古典猪瘟CSFV:古典猪瘟病毒FAT:荧光抗体试验FAVN:荧光抗体病毒中和试验FITC:异硫氰酸荧光素HRPO:辣根过氧化物酶IFA:免疫荧光实验NPLA:过氧化物酶联中和试验4临床诊断4. 1 流行病学CSFV在自然条件下只感染猪,不同年龄、性别、品种的猪和野猪都易感，一年四季均可发生。病猪、潜伏期和康复期带毒猪均能把病毒传播给易感猪。病猪是主要传染源,病猪排泄物和分泌物，病死猪及其脏器，急宰病猪的血、肉和内脏，废水、废料污染的饲料和饮水都可散播病毒。猪瘟主要通过接触传播，经消化道感染。此外，患病和弱毒株感染的母猪也可以经胎盘感染胎儿，产生弱仔猪、死胎、木乃伊胎等。急性病例在 1 周～2 周内死亡,亚急性和慢性病例,病程可长达 2 周～4 周,甚至数月。4.2 临床症状CSFV在所有年龄猪中传播，典型症状为发热、倦怠、结膜炎、厌食、呕吐、腹泻、呆滞和步履螨珊等。出现临床症状后数天,在眼、腹和大腿内侧会出现紫色斑点。非典型症状则没有体温升高现象，但猪呈渐进性消瘦。I SN/T 1379--20104.3病理变化急性病例病理变化不明显或缺乏。典型病例淋巴结呈大理石样红色变化，心外膜、肾、膀胱浆膜、皮下和真皮下出血;亚急性和慢性病例,除有以上病变外,还会在胃肠道粘膜、会咽和喉粘膜中出现坏死性或“纽扣”状溃疡。根据流行病学、临床症状和病理变化可作出 CSF 的初步诊断,但确诊应经实验室试验。5 实验室诊断5.1荧光抗体试验5.1.1仪器和试剂荧光显微镜。5. 1. 1.2冷冻切片机。CSFV荧光抗体结合物。PBS(见A.1);实验用水应符合GB/T6682规定。碳酸盐-甘油缓冲液（见A.2）。5. 1. 1. 6丙酮（分析纯）。载玻片、盖玻片。5.1.2试验程序取样5. 1.2. 1取病猪的扁桃体、脾、肾等病料置冰箱内待检。每一试验都应设阳性和阴性组织样品切片作为对照。样品处理在实验室内将样品组织块修剪出约 1cm×1 cmX0.5 cm 的小块，不经任何固定处理，用冷冻包埋剂包埋或加上蒸馏水置于冰盒中，让组织块在冰盒中冷冻。切片将组织块切成4μm以下切片，置于10 mm×32mm一角切除的洁净盖玻片上。所有切片以相同的方式放置（如缺口朝右向上）固定置丙酮中室温固定10 min或37℃空气干燥20 min。5. 1.2.5 浸润将切片在PBS中浸润片刻，用吸水纸吸去多余的水分，放在湿盒中的架子上。加猪瘟荧光抗体结合物滴加工作浓度的猪瘟荧光抗体结合物到切片上，在密闭的湿盒中 37℃作用30 min。若需要加第二 FIT