SNT 1745-2006进出口大豆、油菜籽和食用植物油中玉米赤霉烯酮的检验方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1745-2006进出口大豆、油菜籽和食用植物油中玉米赤霉烯酮的检验方法Inspection of zearalenone in soybean,rapeseed/canolaand edible vegetable oils for import and export2006-01-26 发布2006-08-16 实施中华人民共和国发布数码防伪“国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1745—2006前言本标准的附录 A为资料性附录。本标由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国上海出人境检验检疫局、北京中检维康技术有限公司上海博尼生物科技有限公司。本标准主要起草人：褚庆华、郭德华、王敏、王雄、沈建英。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。I SN/T出口大豆、油菜籽和食用植物油中玉米赤霉烯酮的检验方法1 范围本标推规定了进出口大豆、油菜籽和食用植物油中玉米赤烯酮检验的抽样、制样，以及免疫亲和柱层析净化高效液相色谱法和免疫亲和柱层析净化荧光光度法测定进出口大豆、油菜籽和食用植物油中玉米赤霉烯酮的方法。本标准适用于进出口大豆、油菜籽和食用植物油中玉米赤烯酮的检验。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容)或修改版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的必威体育精装版版本。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本适用于本标准。GB/T5524植物油脂检验取样、扦样法SN/T0800.1进出口粮油、伺料检验抽样和制样方法3抽样和制样3.1大豆、油菜籽：按照 SN/T 0800.1的规定执行。3.2食用植物油：按照GB/T5524的规定执行。4免疫亲和柱层析净化高效液相色谱法(第一法）4.1方法提要试样经过乙腈-水提取，提取液经过滤、稀释后，滤液经过含有玉米赤霉烯酮特异抗体的免疫亲和柱层析净化，以甲醇通过免疫亲和柱洗脱，洗脱液供带有荧光检测器的高效液相色谱仪测定，外标法定量。4.2试剂和溶液除另有规定外，所用试剂为分析纯、水为重蒸馏水。4.2.1乙腈：色谱纯。4.2.2 乙腈+水(9→1):取 90 mL乙腈加10 ml.水。4.2.3氯化钠。4.2.4磷酸氢二钠。4.2.5磷酸二氢钾。氮化钾。.7吐温-20(Tween-20)。4.2.8盐酸。4.2.9PBS/吐温-20缓冲液：称取8.0g氯化钠、1.2g磷酸氢二钠、0.2g磷酸二氢钾、0.2g氯化钾溶于900mL.水中，用浓盐酸调节pH至7.0,加人1mL吐温-20,用水稀释至1L。4.2.10甲醇：色谱纯。4. 2. 11 玉米赤霉烯酮标准品：纯度大于99%。4.2. 12玉米赤烯酮标准储备溶液：用甲醇（4.2.10)配制0.100mg/mL的玉米赤霉烯酮标准储备1 SN/T 1745—2006液，保存于4℃冰箱备用。4.2.13玉米赤霉烯酮标准工作溶液：准确移取适量的玉米赤烯酮标准储备液，用甲醇稀释成标准工作溶液。4.3仪器设备4.3.1高效液相色谱仪：具有274nm激发波长和大于420nm发射波长的荧光检测器。4.3.2高速均质器：18 000 r/min～22 000 r/min。4.3.3空气压力泵。4.3.4玻璃注射器：10mL：4.3.5玻璃试管：直径12mm，长75mm，无荧光特性。4.3.6微量注射器：100L4.3.7槽纹折叠滤纸。4.3.8玉米赤霉烯酮免疫亲和柱。4.3.9玻璃纤维滤纸：直径9cm，孔径1.0um，无荧光特性。4.4分析步骤4.4.1提取准确称取试样40.0g(准确到0.1 g)（大豆需要磨细且粒度≤2mm)于均质器配置的搅拌钵中，加人4.0g氯化钠（4.2.3)及100mL乙睛+水（9+1)（4.2.2)，以均质器高速搅拌提取1min。以槽纹折叠滤纸(4.3.7)过滤，准确移取10.0ml滤液并加人40.0mL水稀释，用玻璃纤维滤纸（4.3.9)过滤至滤液澄清，滤液备用。4.4.2净化将免疫亲和柱（4.3.8)连接于10ml.玻璃注射器（4.3.4)下。推确移取10.0mL样品提取液于玻璃注射器中，将空气压力泵(4.3.3)与玻璃注射器相连接，调节压力使溶液以约6mL/min流速缓慢通过免疫亲和柱，直至2mL～3mL空气通过免疫亲和柱。以10mLPBS/吐-20缓冲液（4.2.9）和10mL水先后淋洗免疫亲和柱，弃去全部流出液，并使2mL～3mL空气通过免疫亲和柱。准确加人1.5mL甲醇(4.2.10)洗脱，流速为1-mL/min～2mL/min。收集全部洗脱液于玻璃试管（4.3.5)中，供检测用。4.4.3测定高效液相色谱条件4.