NY 801-2004生鲜牛乳及其制品中碱性磷酸酶活度的测定方法.pdf

ICS 67.050X 04NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 801--2004生鲜牛乳及其制品中碱性磷酸酶活度的测定方法Method for determination of alkaline phosphataseactivity in raw milk and its products2004-04-16 发布2004-06-01实施中华人民共和国农业部发布 NY/T 801--2004前言本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准起草单位：农业部乳品质量监督检验测试中心。本标准主要起草人：王金华、张宗城、张均媚。 NY/T 801—2004生鲜牛乳及其制品中碱性磷酸酶活度的测定方法1范围本标准规定了生鲜牛乳及其制品中碱性磷酸酶活度的测定方法。本标推适用于生鲜牛乳及其制品中碱性磷酸酶活度的测定。本标准方法的检出限为0.02μg 苯酚/mL或 g。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然雨，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的必威体育精装版版本。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本适用于本标准。GB6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。碱性磷酸酶活度 alkalinc phosphatase activity产品中具活性的碱性磷酸酶数量，它表示为在一定条件下1mL液态乳或1g固态乳制品复原的液态乳中碱性磷酸酶催化磷酸酚二钠生成苯酚的微克数。4原理生鲜牛乳及其制品中碱性磷酸酶(ALP)在40℃条件下催化磷酸酚二钠生成的苯酚与2,6-二氯醒氯亚胺反应生成蓝色靛酚,在655nm处测定靛酚吸光度，与标准苯酚比较定量。ALPCH,PO, Na2 + H2O-+C,H,OH + Na3 PO4CuSO,C.HsOH + CH2Cl2ONCIC1Hi6N205 试剂所用试剂均为分析纯试剂，实验用水应符合GB6682中一级水的规格或相当纯度的水。5.1 碳酸钠(NazCOs)5.2 碳酸氢钠(NaHCO,)5.3碳酸盐缓冲液,pll9.64称取 4.689g碳酸钠和3.717g碳酸氢钠,溶于水,定容至100 mL。5.4稀释碳酸盐缓冲液,pII9.64将碳酸盐缓冲液用水稀释V10.00—→V100.005.5 磷酸酚二钠(C,H,PO,Naz)5.6 2,6-二氯醒氯亚胺溶液,3 g/L称取 0.030 g2,6-二氯醒氯亚胺(O=CgH,Cl²= NCl),精确至 0.000 1 g,溶人 10 mL甲醇中,存于棕色试剂瓶，4℃冰箱中冷藏。测定当天配制。5.7 硫酸铜溶液,2 g/L1 NY/T 801—2004称取 0.200g 硫酸铜(CuSO4),溶于水,定容至100mL。5.8 正丁醇(CH,CHCH2OI)沸点116℃～118℃。5.9正丁醇溶液,7.5%将75 mL正丁醇和925 mL水混合,存于棕色试剂瓶,4℃冰箱中冷藏。5.10正丁醇溶液,8.3%将83mL正丁醇和 917mL水混合,存于棕色试剂瓶,4℃冰箱中冷藏。5.11 底物显色剂缓冲液,pH9.50取10mL水置于100mL分液漏斗中，称取0.500g磷酸酚二钠（C.HsPO4Na2·2H2O)，精确至0.0001g,溶于其中;加人25mL碳酸盐缓冲液、2滴～3滴2,6-二氯醌氯亚胺溶液和1滴硫酸铜溶液，混勾,静置 5min;再加人3mL正丁醇,混勾,静置分层后,放出底层水相溶液到容量瓶中,用水定容至500 mL;混匀,4℃冰箱中冷藏。测定当天配制。5.12乙酸镁溶液,8.82%称取8.82g乙酸镁[Mg(CHsC00)2*4HzOl,精确至0.0001g,用水定容至 100mL,该溶液含镁10mg/mL.5.13盐酸溶液,0.1 mol/L量取 8.3 mL盐酸(HCI),置于容量瓶中,用水定容至1 L。5.14苯酚标准溶液,1 mg/mL称取1.000g无水苯酚,精确至0.0001g,置于容量瓶中,用盐酸定容至1L,存于棕色试剂瓶，4℃冰箱中冷藏。该溶液稳定性可达数月。5.15苯酚标准溶液，10 μg/ml将苯酚标准储备液用水稀释 V10.00-→V1000.0,存于棕色试剂瓶,4℃冰箱中冷藏。测定当天配制。6仪器6.1 恒温水浴锅精确至1℃。6.2可见光分光光度计655 nm6.3微置移液器1.00 mL,精度 0.01 mL.6.4 冰浴容器6.5离心机3 000 r/mino7试样的制备取样后,样品应保存在0℃～4℃冰箱中,36 h 内开始测定。7.1生鲜牛奶用微量移液器吸取1mL样品,定容至250 mL。7.2全脂牛奶、脱脂牛奶、浓缩乳、巧克力奶置于烧杯内。17.3酸牛奶和其他发酵乳制