WST 80-1996葡萄球菌食物中毒诊断标准及处理原则.pdf

中华人民共和国卫生行业标准葡萄球菌食物中毒WS/T80-1996诊断标准及处理原则Diagnostic criteria and principles of managementfor food poisoning of Staphlococcus aureus1主题内容与适用范围本标准规定了葡萄球菌食物中毒的诊断标准、判定原则和处理原则。本标准适用于葡萄球菌食物中毒。2引用标准GB4789.10—94食品卫生微生物学检验葡萄球菌检验GB14938—94食物中毒诊断标准及技术处理总则3诊断标准3.1流行病学特点3.1.1国内最常见的中毒食品为乳及乳制品，蛋及蛋制品，各类熟肉制品，其次为含有乳制品的冷冻食品，个别也有含淀粉类食品。3.1.2其流行病学特征为起病急，潜伏期一般在2～4h。3.2临床表现主要症状为恶心，剧烈地反复呕吐、腹痛、腹泻等胃肠道症状3.3实验室诊断3.3.1从中毒食品中直接检测肠毒素（肠毒素检测方法见附录A），并确定其型别。3.3.2从中毒食品、患者呕吐物、粪便中经培养分离出金黄色葡萄球菌，菌株再检测肠毒素，证实为同一型别。3.3.3金黄色葡萄球菌检测方法见GB4789.10。4判定原则4.1符合本标准流行病学特点及临床表现。4.2实验室诊断4.2.1中毒食品中检出肠毒素。4.2.2从中毒食品、患者吐泻物中经培养检出金黄色葡萄球菌，菌株经肠毒素检测证实在不同样品中检出同一型别肠毒素。4.2.3从不同患者吐泻物中检出金黄色葡萄球菌，其肠毒素为同一型别。4.2.4凡符合其中一项者即可判断葡萄球菌食物中毒。1997-09-01实施中华人民共和国卫生部1997-01-11批准 WS/T 80-19965处理原则按GB14938执行。 WS/T 80-1996附录A葡萄球菌肠毒素检测方法(补充件)A1设备和材料A1.1均质器。A1.2冰箱。A1.3离心机。A1.4分液漏斗。A1.5透析袋。A1.6振荡培养箱。A1.710 mL、1mL吸管。A1.8电扇。A1.9载玻片。A1.10三角瓶：250mL。A1. 11150mm直径大平皿。A1.12玻璃纸。镊子。A1.13三角棒。A1.14直径2.5mm金属打孔器。A1.15A1.16塑料模板。A2培养基和试剂A2.1产毒培养基蛋白陈10 g多价蛋白陈10 g200mg（氨基氮）胰消化酪蛋白5 g氯化钠1g磷酸氢二钾磷酸二氢钾1 g0.1 g氯化钙0. 2 g硫酸镁0. 01 g葵酸加至1000mL蒸馏水10～12g(固体透析培养用)琼脂pH7.2~7.4,103.43 kPa(15 1b)高压灭菌 30 min。A2.2营养琼脂。A2.31%琼脂糖在注射生理盐水100mL中，加1g琼脂糖68.95kPa(101b)10min高压灭菌。A2.40.2%琼脂糖（蒸馏水配制）。A2.50.2mol/LpH7.5盐水。 WS/T 80--1996A2.6三氯甲烷。A2.7 6 mol/L盐酸。A2.85mol/L氢氧化钠。A2.9生理盐水。A2.100 1%(V/V)乙酸。A2.1110.1%噻嗪红R［用1%(V/V）乙酸配制】。A2.12硅胶或凡士林。A2.13A、B、C、D型葡萄球菌肠毒素和抗血清。A3检验程序从食物中检验肠毒素检验程序如下。A3.1从菌株检测肠毒素菌株+营养琼脂斜面37℃18～24h*用盐水洗下菌苔，放入产毒培养基固体培养法37℃温箱液体培养法37℃振荡培养箱+8000r/min离心20min100℃加热10min再离心取上清液或浓缩至1～2mL*双相琼脂扩散检测肠毒素*报告A3.2从食物检样中提取肠毒素固体检样100g加入0.2mol/LpH7.5盐水100mL4℃浸泡18~24h，液体检样100mL+固体检样用纱布过滤+液体检样、固体检样，离心8000r/min20min+加入三氯甲烷10～15mL，振荡10min，静置，弃去三氯甲烷*加6mol/L盐酸，调pH至4.5，8000r/min离心弃上清液+加5mol/L氢氧化钠，调pH至7.5，8000r/min20min+ WS/T 80-1996取上清液放入透析袋内，浓缩至1～2mL?用微玻片法检测肠毒素*报告A4中毒食品提取肠毒素方法取食品样品100g，加入灭菌0.2mol/LpH7.5磷酸盐缓冲液，均质成匀浆，放冰箱（4℃）浸泡18~24h。用纱布过滤，将滤液离心8000r/min20min，取上清液放入分液漏斗中，加入10mL三氯甲烷，振摇，静置10min，将底层三氯甲烷弃去（如不分层可8000r/min离心20min）。加6mol/L盐酸调pH至4.5，8000r/min离心20min，取上清液，加5mol/L氢氧化钠，调pH至7.5，离心，取上清液，装入透析袋或玻璃纸内，用电扇吹干或放多聚乙二醇