SN_T 1816-2013转基因成分检测 番茄检测方法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1816—2013代替 SN/T 1816--2006番茄检测方法转基因成分检测Detection of genetically modified components-Tomato test methods2013-09-16实施2013-03-01发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 中华人民共和国出人境检验检疫行业标准转基因成分检测番茄检测方法SN/T 1816—-2013*中国标准出版社出版北京市朝阳区和平里西街甲2号（100013)北京市西城区三里河北街16号（100045）总编室：(010址 www. spc. net. cn中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*开本 880×1230 1/16印张 0.75字数 18千字2013年8月第一版2013年8月第一次印刷印数 1--1 600*书号：155066·2-25703 SN/T 1816—2013前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准代替SN/T1816--2006《番茄中转基因成分定性PCR检测方法》。本标准与SN/T1816-2006相比，主要技术变化如下：规范了专业用语和表述方式；修订了原标准的结构；一术语和缩略语参照GB/T19495.1《转基因产品检测通用要求和定义》中的规定；一一在常规PCR检测方法中增加了被检基因的启动子FMV35S;-增加了实时荧光PCR检测方法及其结果判定方法。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国新疆出人境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院。本标准主要起草人：张祥林、王、陈颖、张江国、张伟。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：-SN/T 1816--2006。 SN/T 1816-—2013番茄检测方法转基因成分检测1范围本标准规定了番茄及其制品中转基因成分常规PCR和实时荧光PCR检测方法。本标准适用于对转基因番茄及其制品中转基因成分的定性检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是么不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用手本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T19495.1转基因产品检测通用要求和定义实验室技术要求GB/T19495.2转基因产品检测GB/T19495.3转基因产品检测核酸提取纯化方法SN/T1194植物及其产品转基因成分检测抽样和制样方法：3术语、定义和缩略语和缩略语适用于本文件。GB/T19495.1界定的术语、定防污染措施4GB!T194b5.2中的规定检测过程中防止交叉污染的措施应符5 原理样品经过提取DNA后，针对转基因叠茄内外源基因的基因序列设计引物和探针，通过常规PCR或实时荧光PCR,检测其中是否含有各种内、外源基因，达到对番茄及其制品中有无转基因成分的判定。6仪器和用具6.1仪器实时荧光PCR仪、基因扩增仪、电泳仪、电泳槽、超净工作台、电子天平（感量1mg）、凝胶成像仪、全温水浴、高速冷冻离心机、高压灭菌锅、制冰机、涡旋振荡器、纯水仪、低温冰箱、核酸蛋白分析仪、微型离心机、微波炉。6.2　用具微量可调移液器及配套枪头（0.1 ul～2 uL,2.5 μL～10 μL，2 μl～20 μL，10 μul～100 ul, SN/T 1816--201350 μL～200 μL,100 μL～1000 μl）、PCR反应管、离心管（1.5 mL和 2 mL）、研钵。6.3试剂除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂，实验用水应符合GB/T6682中一级水的规格。6.3.1样品提取试剂无水乙醇,异丙醇，三氯甲烷，异戊醇，乙酸钠，蛋白酶 K，TE缓冲液：Tris 1.21 g/1、Na2-EDTA0. 372 g/L,pH 8. 0;CTAB 裂解液:CTAB 20 g/L、氯化钠 81. 9 g/L, Tris 12. 1 g/L、Na2-EDTA 7.5 g/1.pH 8.0,高压灭菌,使用前加人终浓度为 2%的 β巯基乙醇;RNase A:2 mg/I。6. 3. 2PCR 反应试剂10×PCR 缓冲液（氯化钾100 mmol/L、硫酸铵160 mmol/I、硫酸镁20 mmol/L、Tris-HCl200 mmol/L、1% TritonX-100、BSA 1 mg/mL),MgCl2(2. 5 mmol/1.),dNTP 溶液(dATP、dTTP、dCTP、dGTP,各 2.5 mmol/IL），Taq DNA 聚合酶,UNG 酶（以dUTP 代替dTTP时）。引物和探针（符