NY_T 1833.1-2009农药室内生物测定试验准则 杀线虫剂 第1部分 抑制植物病原线虫试验 浸虫法.pdf

ICS 65.100B 17NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 1833.1-2009农药室内生物测定试验准则杀线虫剂第1部分：抑制植物病原线虫试验浸虫法Guideline for laboratory bioassay of pesticidesPart 1: Immersion test for nematocides inhibiting nematode2009-12-22 发布2010-02-01实施中华人民共和国农业部发布 NY/T 1833.1—2009前言NY/T1833《农药室内生物测定试验准则杀线虫剂》分为如下部分：第1部分：抑制植物病原线虫试验浸虫法....本部分是《农药室内生物测定试验准则杀线虫剂》的第1部分。本部分由农业部种植业管理司提出并归口。本部分起草单位：农业部农药检定所。本部分主要起草人：朱春雨、彭德良、吴新平、张文君、陶岭梅、嵇莉莉。I NY/T 1833. 1—2009农药室内生物测定试验准则杀线虫剂第1部分：抑制植物病原线虫试验浸虫法1范围本部分规定了浸虫法测定杀线虫剂抑制植物病原线虫活性试验的基本要求和方法。本部分适用于测定杀线虫剂对植物病原线虫活性的农药登记室内试验。2试剂与材料本标准所用试剂，凡未指明规格者，均为分析纯，水为去离子水。2.1生物试材供试靶标线虫应该选择南方根结线虫（Meloidogyne incognita）、花生根结线虫（Meloidogyneare-naria）、北方根结线虫（Meloidogynehapla）、大豆胞囊线虫（Heteroderaglycines）等侵染期二龄幼虫，以及龄期一致的茎线虫（Ditylenchusdestructor）和松材线虫（Bursaphelenchusylophilus）等。2.2试材准备将试验用的根结线虫、孢囊线虫在适宜的活体寄主植物上培养，待产卵后备用。茎线虫用镰刀菌培养，松材线虫用灰葡萄孢菌培养3周后备用。2.3试验药剂采用原药（母药），并注明通用名、含量和生产厂家。2.4对照药剂采用已经登记注册且生产上常用药剂的原药。对照药剂的化学结构类型或作用方式应与试验药剂相同或相近。3仪器设备3.1电子天平(感量0.1mg)。3.2离心机。3.3生化测试板。3.4移液器或移液管。3.5计数器。3.6解剖镜。3.7恒温培养箱等。4试验步骤4.1线虫悬浮液准备从活体寄主植物上挑取根结线虫的卵块用水清洗，胞囊线虫的胞囊用0.4mmol/L氯化锌（ZnC12）溶液清洗，置于培养皿的湿滤纸上，20℃～25℃下孵化，获得龄期一致的二龄幼虫。用水将培养好的茎线虫、松材线虫从培养基上洗脱，过滤，1000r/min下离心2min，弃上清液，加水，再离心，最后用水将线虫重悬浮至每毫升≥100头线虫，备用。4.2药剂配制1 NY/T 1833.1—2009水溶性药剂直接用水溶解、稀释，其他药剂选用合适的有机溶剂（如丙酮、氯仿、乙醇等）溶解，再用含有适量表面活性剂如0.1%吐温80（或0.1%Triton-X100)的水溶液稀释。根据药剂活性，按照等比或等差的方法设置5个～7个系列质量浓度。每个质量浓度药液量不少于10mL。4.3药剂处理用移液器或移液管从低浓度到高浓度，依次吸取药液3mL分别加入试管中，然后吸取制备好的等量线虫悬浮液3mL加人试管内，使药液与线虫悬浮液等量混合均匀。用移液器移取一定体积的上述混合液于多孔生化测试板的小孔内，加盖，于25℃恒温培养24h。根据试验要求和药剂特点，可适当缩短或延长培养时间。每处理4次重复，并设不含药剂的处理作为对照。5调查从各处理中取1mL混合液在解部镜下观测线虫死亡情况，每重复观测线虫数应不少于100头，记录调查的总线虫数和死亡线虫数。死亡的线虫僵直，用发丝针或竹丝针触碰仍不能弯曲运动。6数据统计与分析6.1计算方法根据调查数据，计算各处理的死亡率和校正死亡率，单位为百分数（%）。按公式(1)和(2)计算，计算结果均保留到小数点后两位：KP1 =X 100(1)N式中：Pi——死亡率;K——死亡线虫数;N—调查总线虫数。P- Pe× 100(2)Pz =1P。式中：P2—校正死亡率；P.—处理线虫死亡率；P。一一对照线虫死亡率。若对照死亡率小于5%，无需校正；若对照死亡率在5%～15%之间，应按照公式（2)进行校正；对照死亡率大于15%，试验需要重做。6.2统计分析根据药剂浓度对数值及对应植物病原线虫校正死亡率的几率值作回归分析，计算各药剂的LCso、LCgo、b值和标准误等数值及其95%置信限，评价供试药剂对靶标线虫的活性。7结果根据统计结果进行分析评价，写出正式试验报告，并列出原始数据。2 600210081/中华人民共和国农业行业标准农药室内生物测定试验准则杀线虫剂第1部分：抑制植物病原线虫试验