SNT 2160-2008动物源食品中氢化泼尼松残留量检测方法 气相色谱-质谱/质谱法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2160—2008动物源食品中氢化泼尼松残留量检测方法气相色谱-质谱/质谱法Determination of prednisolone residues in animal food--GC-MS/MS method2008-09-04发布2009-03-16实施中华人民共和国0发布证金腰线19615路疏国家质量监督检验检疫总局、数码防伪 SN/T 2160-2008前言本标准的附录 A为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准由中国检验检疫科学研究院负责起草。本标准主要起草人：仲维科、丁罡斗、李翔、李礼、刘汉霞、张垚、孙毅之。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。 SN/T 2160—2008动物源食品中氢化泼尼松残留量检测方法气相色谱-质谱/质谱法1范围本标准规定了动物源食品中氢化泼尼松残留量的检测方法。本标准适用于动物源食品中氢化泼尼松残留量的检测。2测定方法2.1方法提要样品用乙腈提取，经C18固相萃取柱净化，净化后的氢化泼尼松在酸性条件下用K2Cr2O7快速氧化衍生，气相色谱-二级质谱法(GC-MS2)检测,外标法定量。2.2 试剂与材料2.2.1甲醇（色谱纯）。2.2.2乙腈（色谱纯）。2.2.3丙酮（色谱纯）。2.2. 4正已烷（色谱纯）。2.2.5二氯甲烷(色谱纯)。2.2.6乙酸乙酯(色谱纯）。2.2.7乙醇（色谱纯）。50-24-8,分子式CaH28Os）：纯度≥99%。2.2.8氢化泼尼松标准品（prednisolone,CAS氢化泼尼松标准储备溶液:10mg/L无水甲醇。2.2.9乙酸-乙酸钠缓冲溶液(pH4.6,在 158 mL乙酸钠溶液中加人42mL乙酸)。2.2. 10酸性 KzCr2O溶液(取18 mL/水,加人2.mL,浓硫酸,再加1.0 gKzCr2On）。2. 2. 11酶解汁(含 β-葡萄糖醛苷酶和磺酯酶大于≥i0 0000go μ/g)。2.2. 12C18 固相萃取柱(3 mL,500 mg）2.2. 132.2. 14碳酸氢钠溶液（10%）。2.3仪器和设备2.3.1气相色谱-离子质谱(EI源）2.3.2氮吹仪。2.3.3高速离心机。振荡器。.5涡旋振荡器。2.3.6固相萃取装置。2.3.7超声清洗器。2.4测定步骤2.4.1＇提取称取 10.00g组织样品（猪肉、猪肝和猪肾)于组织捣碎器中粉碎成浆状，置于 50 mL离心管内，加人15mLpH4.6的乙酸-乙酸钠缓冲溶液，再加人200μl.酶解汁，振荡10min、超声15min后于60℃水浴中加热2 h。冷却后加人20mL乙腈并振荡30 min，以7500 r/min离心分离 20 min，将上层乙腈1 SN/T 2160--2008转移至另一离心管内,加人 8 mL正已烷、2 mL二氯甲烷后振荡,再以 4 500 r/min离心5 min，然后移取中间层至比色管内并在50℃条件下氮气吹干。将吹干后的残渣用1mL乙醇涡旋溶解，再加人9mL水混匀，备过C18柱。2.4.2 净化C18小柱分别用5mL甲醇和5 mL水活化,5mL乙醇-水（体积比1：9)平衡,加入上述乙醇_上样溶液后，依次用5mL水、5mL丙酮-水（体积比1：9）、3mL甲醇-水（体积比4：6)淋洗并抽干，再用5mL正已烷淋洗，最后用2mL乙酸乙酯洗脱，收集洗脱液并用氮气吹干。2.4.3衍生化将上述残渣用100μL乙睛复溶，加100μL酸性K2Cr20z氧化液并混匀，于 60℃水浴中加热18 min,冷却后依次加人200 μL10%碳酸钠溶液、1mL去离子水、3mL二氯甲烷，超声提取10 min后于 4500 r/min离心5min。将下层有机相转移、氮气吹干，加乙酸乙酯定容至1mL，用于 GC-MS/MS测定。2.4.4测定仪器条件a)色谱柱:DB-5 或其他性能相当的柱子(30 mX0.25 mmX0.25 μm）;b）色谱柱温度：70℃（保持1min），以25℃/min升温至270℃（保持0min），再以15℃/min升温至310℃（保持2min)；c)进样口温度：280℃；d)离子源温度：250℃；e)传输线温度：280℃；f)离子源：电子轰击电离源；g)测定方式：二级质谱监测模式检测（MS/MS)；h）监测离子：氢化泼泥松母离子m/z160,子离子m/z131、145；i）载气：高纯He，纯度≥99.999%；i)进样方式：不分流进样；k)进样量:1 μL;1）电离能量：70eV；m）载气流量：1.0mL/min;n）碰撞诱导解离(CID)电压为：1.0 V。色谱-质谱确证和测定在上述仪器条件下()经氧化衍生的氢化泼尼松保留时间约为12.37min。气相色谱-二级质谱监测模式检测的总