SNT 2206.5-2009化妆品微生物检验方法 第5部分：肠球菌.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2206.5—2009化妆品微生物检验方法第5部分：肠球菌Determination of microbiological in cosmetics-Part 5:Enterococci2009-02-20 发布2009-09-01实施(41中华人民共和国发布线专具国家质量监督检验检疫总局数码防伪 SN/T 2206.5—2009言前SN/T2206《化妆品微生物检验方法》分为以下部分：-第1部分：沙门氏菌；一第2 部分:需氧芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌;一第3部分：肺炎克雷伯氏菌；一第4部分：链球菌；第5 部分:肠球菌。本部分为SN/T2206的第5部分。本部分的附录 B为规范性附录,附录 A、附录 C 和附录 D为资料性附录。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国上海出人境检验检疫局、中华人民共和国深圳出入境检验检疫局。本部分主要起草人：杨捷琳、顾鸣、袁辰刚、李晓虹、朱海。本部分系首次发布的出人境检验检疫行业标准。2 SN/T 2206. 5—2009化妆品微生物检验方法第5部分：肠球菌1 范围SN/T2206的本部分规定了化妆品中肠球菌的检验方法。本部分适用于化妆品中肠球菌的检验。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过SN/T2206的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的必威体育精装版版本。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本适用于本部分。GB/T7918.1化妆品微生物标准检验方法总则3术语和定义下列术语和定义适用于SN/T2206的本部分。3.1肠球菌Enterococci-类革兰氏阳性球菌，兼性厌氧，无芽孢和荚膜，可分解胆汗七叶苷。4材料和设备4.1 振荡器。4.2 三角瓶:250mL。4.3玻璃珠。4.4玻璃棒。4.5²刻度吸管:1 mL,10 mL。4.6均质器。4.7恒温培养箱36℃±1℃,46℃±1℃,32.5℃±2.5℃。4.8天平:感量为0.001 g。4.9高压灭菌器。5 培养基和试剂5.1D/E 中和培养基(Dey/Engley 中和培养基),参见附录 A第 A.1 章。5.2叠氮化钠葡萄糖肉汤，参见附录 A第 A.2 章。5.3KF培养基(加中和剂),参见附录 A第 A.3章。5.4Pfizer 肠球菌选择性琼脂(PSE琼脂），参见附录 A第 A.4 章。5.53%过氧化氢溶液。5.6革兰氏染色液。5.76.5%氯化钠葡萄糖琼脂,参见附录 A第 A.5章。 SN/T 2206. 5--20096检验程序6.1化妆品中肠球菌MPN计数法检验流程图见图1。检样10g制成1：10样品稀释液取1mL加入到叠氮化钠葡萄糖肉汤36℃±1℃培养24 h±2 h■不混浊混浊确证实验肠球菌阳性肠球菌阴性MPN法报告肠球菌数图 1化妆品中肠球菌MPN计数法检验流程图6.2化妆品中肠球菌平板计数法流程图见图2。检样10g制成110样品稀释液4110倍梯度稀释1选择2～3个适宜连续稀释度，各取1mL分别加入无菌培养Ⅲ7PPSE琼脂KF琼脂确证实验一肠球菌阳性阳性阴性肠球菌计数及计算结果报告图2化妆品中肠球菌平板计数法流程图6.3样品制备样品按照GB/T7918.1供检样品的制备方法进行。样品制备时，也可参见附录A第A.1章的D/E中和培养基代替生理盐水或 SCDLP培养基。参见附录C中列出的化妆品中常用防腐剂种类及微生物检测时所使用的中和剂种类和配方，可根据不同产品成分参照使用。2 SN/T 2206.5—20096.4最大近似数(MPN)法6.4.1用适当稀释的样液接种叠氮化钠葡萄糖肉汤管，每个稀释度接种3管，接种量为1mL或1mL以下时，使用10mL单料管；接种量为10mL时，使用10mL双料管,接种后的试管置 36℃±1℃培养24 h士2 h，检查各试管浑浊情况，若浑浊不明显，继续培养至 48h后记录。6.4.2培养24 h士2h或48h士2h后，对所有呈现浑浊的叠氮化钠葡萄糖肉汤管进行确证，用接种环将各管培养物划线于Pfizer肠球菌选择性琼脂(PSE琼脂)平板或KF琼脂平板，倒置于36℃士1℃培养24 h土2 h。肠球菌属细菌在肠球菌琼脂平板上形成带棕色环的棕黑色菌落，在KF平板上形成暗红至粉红色菌落，边缘整齐；对典型或可疑菌落至少挑取10个按6.6进行确证实验。每管培养物中有一个菌落确认为肠球菌,则该管视为阳性。6.4.3结果报告：根据接种的样品量和确证为肠球菌的管数，查MPN表（见附录B），报告每克（毫升）Lg(mL)样品中肠球菌的MPN值。6.5平板计数法6.5.1取1mL适当稀释的检液加人90mm