SC_T 7219.5-2015三代虫病诊断规程 第5部分：细锚三代虫病.pdf

ICS 65.020.30B 50SC中华人民共和国水产行业标准SC/T 7219.5-2015三代虫病诊断规程第5部分：细锚三代虫病Protocols for diagnosis of Gyrodactylosis--Part 5 : Infection with Gyrodactylus sprostonae2015~02-09发布2015-05-01实施中华人民共和国农业部发布 SC/T 7219.5—2015前言SC/T 7219《三代虫病诊断规程》为系列标准：第1部分：大西洋鲑三代虫；第 2部分:鲩三代虫病；第3部分：鲢三代虫病；第4部分：中型三代虫病；第5部分：细锚三代虫病；一第6部分：小林三代虫病;本部分为SC/T7219的第5部分。本部分按照GB/T1.1--2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由农业部渔业渔政管理局提出。本部分由全国水产标准化技术委员会（SAC/TC156)归口。本部分起草单位：中国科学院水生生物研究所、全国水产技术推广总站。本部分主要起草人：李文祥、王桂堂、邹红、吴山功、陈爱平。TI SC/T 7219.5—2015三代虫病诊断规程第5部分：细锚三代虫病1 范围本部分规定了细锚三代虫病的感染对象与临床症状，细锚三代虫（也叫史若兰三代虫，Gyrodactylussprostonae)的采集与固定、形态学鉴定和分子检测的方法以及细锚三代虫病的综合判定。本部分适用于鲤、鲫的细锚三代虫病的流行病学调查、诊断、监测和检疫2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法SC/T7103　水生动物产地检疫采样技术规范3试剂和材料3.1 水符合 GB/T 6682中一级水的规格。3.2乙醇：分析纯。3.3Taq酶：一20℃保存,避免反复冻融。3. 4 dNTPs:含 dATP、dTTP、dGTP 和 dCTP 各 10 mmol/ L。3.5上游引物:5-TTTCCGTAGGTGAACCT-3。3.6 下游引物:5-TCCTCCGCTTAGTGATA-3。3.7 矿物油:不含 DNA酶和 RNA 酶。3. 8DNA marker 2 000:2 000 bp、1 000 bp、750 bp、500 bp、250 bp、100 bp。3.9其他试剂见附录 A。41仪器和设备4.1角解剖盘、剪刀、镊子、解剖针、手术刀。4.2体视显微镜和带测微标尺的光学显微镜。4.3盖玻片、载玻片、培养皿。4.4　电子天平。4.5普通台式离心机和高速冷冻离心机。4.6普通冰箱和超低温冰箱。4.71微量移液器。4.8PCR扩增仪。4.9离心管和PCR管。4.10紫外透射仪。4.11水平电泳系统。1 SC/T 7219. 5—20155 感染对象与临床症状5.1感染对象细锚三代虫能感染鲫（Carassius auratus auratus）、东北鲤（Cyprinus carpio hematopterus）、翘嘴红(Erythroculter ilishaeformis)和鲶(Silurus spp.)等。5. 2 临床症状细锚三代虫主要寄生于体表，病鱼常出现蹭擦池壁、跃出水面的行为；有些病鱼反应迟钝，常在水流缓慢的地方出现，体表因黏液增多变成淡灰色，背鳍、尾鳍和胸鳍的边缘出现糜烂。6三代虫采集与固定6.1病鱼采集仔细观察待检鱼类的临床症状和行为，捞取具有典型症状的鱼类。采样方法、样品数量、样品封存和运输应符合SC/T7103的规定。6.2三代虫样品的收集6.2.1现场采集剪取鳍条、鳃丝或刮取部分体表黏液，置于载玻片上。滴加数滴清水，置于体视显微镜下观察。用解剖针将三代虫从鳍条或鳃丝或体表黏液中分离，用吸管吸出，放在盛有清水的培养皿中，每尾病鱼至少采集成虫10条。6. 2.2 固定病鱼中的采集剪取病鱼鳍条或鳃丝放在载玻片上，逐滴加人自来水浸泡10min，置于体视显微镜下观察。发现三代虫后，用解剖针将虫体分离，放在盛有清水的培养皿中；同时，镜检固定病鱼所用容器底部的沉淀物。如发现有从鱼体脱落的三代虫，用吸管吸出，放在盛有清水的培养皿中。6.3三代虫样品的固定与保存加一滴清水到载玻片上，用吸管吸取一个虫体置于水滴中，轻轻地盖上盖玻片。用一张滤纸在盖玻片边缘缓慢吸水，直到水基本吸干为止。加上一滴APG溶液（见附录A.1)到盖玻片边缘，直到浸满盖玻片与载玻片之间的空隙。用于形态学鉴定的虫体样本可用70%酒精保存，用于PCR鉴定的虫体样品可用95%酒精保存。7 细锚三代虫的鉴定7.1细锚三代虫的形态学鉴定